微生物的分离和纯培养.ppt

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第29页,共56页，2024年2月25日，星期天3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。第30页,共56页，2024年2月25日，星期天4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第31页,共56页，2024年2月25日，星期天2、接种⑴平板划线法交叉划线法连续划线法第32页,共56页，2024年2月25日，星期天1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环_______2、在_______旁冷却接种环，并打开棉塞3、将试管口通过火焰4、将已______的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划__________条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。5、将试管通过火焰，并塞上棉塞火焰冷却三至五7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的_______开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。末端烧红8、将平板_____放入培养箱中培养。倒置第33页,共56页，2024年2月25日，星期天为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第34页,共56页，2024年2月25日，星期天6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法a.梯度稀释菌液：菌液第35页,共56页，2024年2月25日，星期天b.涂布平板：滴灼试涂取0.1ml菌悬液微量移液器第36页,共56页，2024年2月25日，星期天Pourplate(3)稀释混合平板法（课本P14)第37页,共56页，2024年2月25日，星期天将接种后的培养基和一个未接种的培养基，放入37℃恒温箱中倒置培养12h-24h,直到长出菌落为止。3、培养第38页,共56页，2024年2月25日，星期天4、实验结果观察第39页,共56页，2024年2月25日，星期天5、菌株的保存方法（1）临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。（2）长期保存：甘油冷冻管藏法搁置斜面第40页,共56页，2024年2月25日，星期天六、微生物数量的计算直接计数法间接计数法第41页,共56页，2024年2月25日，星期天（一）直接计数法

——显微镜直接计数法将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出体积内的微生物总数。一般适用于纯培养液悬浮液中单细胞菌体的计数。优点：直观、快速、操作简单缺点：不能区分死菌与活菌，所得为总数，结果往往偏高不适于对运动细菌的计数需要相对高的细菌浓度个体小的细菌在显微镜下难以观察第42页,共56页，2024年2月25日，星期天1、血球计数板计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网。每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。第43页,共56页，2024年2月25日，星期天****#####血球计数板计数室有两种刻度1大格=16中格25×16=400小格1大格=25中格16×25=400小格第44页,共56页，2024年2月25日，星期天计数室边长为1mm，则计数区的面积为l×1＝1mm2，盖上盖玻片后计数室高度为0.1mm，所以一个计数室的体积为l×0.1＝0.1mm3。(注意：1ml＝1000mm3)计数室容积第45页,共56页，2024年2月25日，星期天1、稀释