DNA的粗提取与鉴定(实用版).ppt

*专题5DNA和蛋白质技术讨论2：真原核生物的遗传物质存在于哪里？讨论1：生物的遗传物质是什么？讨论3：怎样才能将细胞内的DNA提取出来？课题1DNA的粗提取与鉴定一、实验目标：1.了解DNA的理化性质，理解实验原理。2.尝试对生物组织中的DNA进行粗提取与鉴定。二、实验原理1、理化性质生物大分子的提取思路：根据DNA、RNA、蛋白质和脂质等的理化性质的差异（1）DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。什么浓度溶解度最小？曲线如何变化？如何利用NaCl的溶解变化使之溶解或析出？0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L2mol/L浓度可使DNA溶解；0.14mol/L浓度可使DNA析出。（2）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。（3）蛋白酶水解蛋白质蛋白质60--80℃变性，DNA80℃以上变性洗涤剂瓦解细胞膜2、鉴定DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。三、实验过程（一）实验材料的选取原则：含有DNA，含量高，易成功。真核细胞动物细胞鸡血其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。植物细胞（有细胞壁）2.若是植物细胞，如何获取DNA滤液？(二)破碎细胞，获取含DNA的滤液1.若是动物细胞，如何获取DNA滤液？为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等蒸馏水对于鸡血细胞属于低渗溶液，水分子大量进入细胞，使血细胞涨破(三)去除滤液中的杂质滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。阅读课本提供的三个方案，选择一种，试说明理由。方案一为什么反复地溶解析出DNA，能够去除杂质？1、加2mol/LNaCl，过滤2、加蒸馏水调至0.14mol/L，过滤3、再加2mol/LNaCl，过滤溶解DNA，去除不溶杂质DNA析出，去除溶液中的杂质再次溶解DNA，去除不溶杂质析出：滤液+同体积95%冷却酒精白色丝状物(四)DNA的析出用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。*