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三七素对凝血功能的影响

新草本植物官方消息记载“三七根、止痛药”。三七根止血的主要成分是三七素［1］,是一种非蛋白氨基酸。目前,对于三七素止血机制研究报道较少,研究表明［2］,三七素能明显缩短凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。郑璐等［3］研究发现三七素止血作用可能是通过促进组织胺使血管收缩引起的,但是没有系统阐明三七素的止血机制。血液凝固是一系列凝血因子相继酶解激活的过程,最终生成凝血酶,形成纤维蛋白凝块［4］。本实验将针对三七素在凝血系统、纤溶系统和血小板聚集过程中对形成纤维蛋白凝块,即对血液凝固的影响,以不同浓度三七素作为实验对象以期能够探究三七素对凝血功能的影响及其止血机制。

材料表面

1药物、检测试剂和仪器

三七素(成都康邦生物科技有限公司,纯度98%,批号CB5051);酚磺乙胺注射液(上海信宜金朱药业有限公司,批号111156);ADP(美国Sigma公司,批号91M7002V);胶原(美国Sigma公司,批号68K3783V);凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原含量(FIB)检测试剂盒均购自上海太阳生物技术有限公司;血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、大鼠组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、大鼠组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)ELISA试剂盒均购自上海将来实业有限公司;一次性真空采血管(上海新睿生物科技有限公司,批号A1207010)。其余试剂均为市售分析纯。

2仪器、检测方法

SH1000酶标仪(美国Corn公司),CT14RD台式高速冷冻离心机(上海天美科学仪器有限公司),QX200全血血小板聚集仪(上海医大仪器有限公司),AB204N电子天平(瑞士Mettler公司)。

3男性,男性,男性,各半

SPF级SD大鼠60只,体重(200±20)g,雌雄各半;SPF级昆明种小鼠60只,体重(20±2)g,雌雄各半,均购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,许可证号:SCXK(沪)2008-0016。

方法

1三素

昆明种小鼠60只,体重(20±2)g,雌雄各半,随机分为空白对照组(5mL·kg－1生理盐水),阳性对照组(2.5%酚磺乙胺注射液,40mg·kg－1),三七素Ⅰ~Ⅳ组(40,20,10,5mg·kg－1,注射量均为1mL·kg－1)。腹腔注射30min后,用直径0.5mm的毛细管眼眶取血,秒表计时,每隔10s掰断1次毛细管,出现血细丝,记为凝血时间。

2材料制备待测血浆

2.1PT,TT,APTT,FIB测定SD大鼠60只,体重(200±20)g,雌雄各半,按上述分组方案给药,腹腔注射30min后,用乙醚将大鼠致昏迷,腹腔主动脉取血,注入加有1.8mL枸橼酸钠(3.8%)的离心管内,轻轻摇匀,血液标本放置不超过4h,3000r·min－1离心15min,取上清液得到待测血浆。按照各试剂盒的要求进行PT,TT,APTT,FIB的测定。

2.2血小板聚集性的测定SD大鼠60只,体重(200±20)g,雌雄各半,按上述分组方案给药,腹腔注射30min后,用乙醚将大鼠致昏迷,腹腔主动脉取血,枸橼酸钠抗凝,轻轻摇匀,放置1~4h后测定,分别以ADP、胶原做诱导剂,按QX-200全血血小板聚集仪说明书进行测量,其度量值为欧姆(Ω)。

3统计处理方法

统计采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析,实验数据以ue0af±s表示。

结果

1组凝血时间和凝血速度的比较

与空白对照组比较,三七素Ⅰ~Ⅳ组均能明显缩短凝血时间,且凝血时间随着注射量增加而缩短。三七素浓度组与酚磺乙胺组比较,凝血时间缩短。见表1。

2对大鼠血液中血浆纤维素原含量的影响

与空白对照组比较,三七素40,20mg·kg－1能显著缩短凝血酶时间(P<0.01或0.05),同时三七素能明显缩短活化部分凝血活酶时间(P<0.01),并且三七素40,20mg·kg－1可以增加大鼠血液中血浆纤维蛋白原的含量(P<0.05)。三七素各组与酚磺乙胺注射液组相比,凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原的含量均有统计学差异,结果见表2。

3对三组血小