免疫组化方法学讲稿.pdf

免免疫疫组组织织化化学学 iimmmmuunnoohhiissttoocchheemmiissttrryy 一一、、概概念念：： 化化学学性性质质 组组织织化化学学 化化学学反反应应颜颜色色变变化化**组组织织细细胞胞原原位位 变变化化 化化学学成成分分 ＊＊成成色色、、沉沉淀淀、、荧荧光光、、同同位位素素、、高高 子子密密度度标标志志物物 酶酶组组织织化化学学 生生物物化化学学的的酶酶－－底底物物反反应应 并并借借助助显显色色反反应应来来实实现现 免免疫疫组组织织化化学学 免免疫疫化化学学的的抗抗原原一一抗抗体体反反应应 原原位位杂杂交交组组织织化化学学 分分子子生生物物学学 DDNNAA或或RRNNAA基基因因片片段段杂杂交交反反应应 免免疫疫组组织织化化学学定定义义：：应应用用免免疫疫学学和和组组织织化化学学原原理理，，用用 特特殊殊标标记记物物标标记记抗抗体体或或抗抗原原通通过过抗抗原原抗抗体体反反应应，，检检测测机机体体 内内具具 抗抗原原性性化化学学物物质质或或组组织织与与细细胞胞等等成成分分的的技技术术，，并并对对 其其抗抗原原或或抗抗体体定定性性、、定定位位及及定定量量分分析析。。 组组织织细细胞胞内内显显现现颜颜色色反反应应的的信信号号：： 荧荧 光光 素素 免免疫疫荧荧光光技技术术 酶酶 免免疫疫酶酶标标技技术术 金金属属颗颗粒粒 免免疫疫金金属属标标记记技技术术 二二、、免免疫疫组组织织化化学学的的基基本本知知识识 11.. 抗抗原原 （（aannttiiggeenn,, AAgg）） 11)) 免免疫疫原原性性 22)) 免免疫疫反反 性性 33)) 抗抗原原分分类类 结构抗原 细胞骨架蛋白 （中间丝）、癌基因及抗癌 基因蛋白产物 入侵抗原 病原微生物如：HPV、HBV等 分泌抗原 酶、激素、粘液蛋白 沉积抗原 免疫球蛋白、补体、免疫复合物 22..抗抗体体 （（aannttiibbooddyy,,AAbb））：：抗抗体体是是一一种种血血清清蛋蛋白白 11)) 免免疫疫球球蛋蛋白白 （（iimmmmuunnoo lloobbuulliinn,,II ））及及其其种种类类 II AA II DD II EE II GG II MM 型型 型型 型型 型型 型型 免免疫疫组组化化应应用用一一抗抗大大多多属属II GG型型抗抗体体，，而而II GG作作 为为抗抗原原时时其其特特异异性性位位点点在在重重链链FFCC段段。。 33..多多克克隆隆抗抗体体与与单单克克隆隆抗抗体体 11))定定义义：： 多多克克隆隆抗抗体体((ppoollyycclloonnaallaannttiibbooddyy,,PPccAAbb))：：由许多 细胞针对多个抗原决定簇(表位)所产生的抗体 为多克隆抗体 单单克克隆隆抗抗体体((mmoonnoocclloonnaallaannttiibbooddyy,,MMccAAbb))：：针对其 单个抗原决定簇由单 细胞所产生的抗体为 单克隆抗体 22)) 产产生生：： 多多克克隆隆抗抗体体：：通通常常以以纯纯化化的的抗抗原原直直接接免免疫疫动动 物物而而得得到到 单单克克隆隆抗抗体体：：通通过过应应用用 胞胞融融合合的的杂杂交交瘤瘤 ((hhyybbrriiddoommaa))技技术术而而获获得得 44..抗抗体体制制备备 第第一一代代多多克克隆隆抗抗体