基因工程常用的工具酶.ppt

第一页，共三十四页，2022年，8月28日 限制性核酸内切酶：简称限制酶。是一类能识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶 20世纪50年代发现： λ噬菌体 E.coli B PFU10-4 E.coli B PFU1 λ噬菌体 DNA被降解 DNA被修饰 E.coli B 限制性核酸内切酶：降解外来DNA 防御 修饰酶：DNA甲基化 保护 寄主细胞控制的限制与修饰系统（R/M体系）！ 第二页，共三十四页，2022年，8月28日 一、限制酶的种类 限制修饰活性 酶蛋白结构 相对分子质量 切割位点 切割作用辅助因子 实用性 代表 Ι型酶 Ⅱ型酶 Ⅲ型酶 同时存在 单独存在 同时存在 多亚基结构 单亚基结构 两个亚基 30万dal 2-10万dal Ι 、Ⅱ之间 与识别位点不一致 与识别位点一致 与识别位点不一致 Mg2+、ATP、SAM Mg2+ Mg2+、 SAM 低 高 低 EcoK、EcoB Hind Ⅱ EcoPΙ 第三页，共三十四页，2022年，8月28日 二、限制酶的命名 命名原则 限制酶寄主微生物属名头字母（大写）和种名前两字母（小写）表示寄主物种 菌株名位于其后 罗马数字表示同一寄主菌株的不同限制修饰系统 Haemophilus influenzae d HindΙ、 HindⅡ、 Hind Ⅲ 属名 种名 株名 不同限制修饰系统 第四页，共三十四页，2022年，8月28日 三、Ⅱ型限制酶的特性-识别序列 识别双链DNA分子中特定的4 - 8对核苷酸序列 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的识别序列 EcoR I的切割位点 5‘ … G A G G C C G A G … 3’ 3‘ … C T C C G G C T C … 5’ HaeⅢ的识别序列 HaeⅢ 的切割位点 第五页，共三十四页，2022年，8月28日 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 部分限制酶能识别多种核苷酸序列 5‘ … G C G T Py Pu A C G A G … 3’ 3‘ … C G C A Pu Py T G C T C … 5’ HindⅡ的识别序列 Py dCMP、dTMP Pu dAMP、dGMP 第六页，共三十四页，2022年，8月28日 识别序列呈典型的旋转对称型回文结构 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的识别序列 EcoR I的切割位点 回文结构:两条核苷酸链的核酸序列呈双重旋转对称排列的 DNA双螺旋结构 第七页，共三十四页，2022年，8月28日 三、Ⅱ型限制酶的特性-切割后形成的末端 粘性末端： 5‘ … GTGAATTCGA … 3’ 3‘ … CACTTAAGCT … 5’ EcoR I 5‘ … GTG AATTCGA … 3’ 3‘ … CACTTAA GCT … 5’ 平齐末端： 5‘ … GAGGCCGAG … 3’ 3‘ … CTCCGGCTC … 5’ 5‘ … GAGG CCGAG … 3’ 3‘ … CTCC GGCTC … 5’ HaeⅢ 彼此具有互补核苷酸的单链延伸末端 第八页，共三十四页，2022年，8月28日 三、Ⅱ型限制酶的特性-同尾酶、同裂酶 同尾酶:来源各异、识别序列也不相同，但都产生相同粘性 末端的一类限制酶 5‘ … GTGGATCCGA