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中医药治疗骨骼肌造血微环境研究进展 骨髓承载性微环境是骨髓血浆干燥的生存环境。经过更新，它可以产生大量的内部环境。它包括微血管系统、基质干细胞、细胞外基质和多种细胞因子。基质干细胞也称为间充质干细胞, 在一定条件下可向成骨细胞、造血基质细胞、脂肪细胞等分化。细胞外基质有纤维连接蛋白、层黏蛋白和胶原蛋白等, 而细胞因子则包括多种黏附分子、趋化因子等, 共同协调造血干细胞的生命活动。造血细胞在微环境各种因素的调控下增殖、分化、发育及成熟。再生障碍性贫血、白血病等多种血液病涉及骨髓造血微环境的改变。因此研究骨髓造血微环境, 对于阐明血液系统疾病的发病机理、改善治疗方案具有重要意义。近年来国内外学者对骨髓造血微环境的研究取得了较大进展, 中医药治疗多种血液病具有一定的特色优势。本文就骨髓造血微环境及中药调控作用的研究现状综述如下。 1 相关因素包括骨髓血浆微环境的设计 1.1 不同照射条件对小鼠骨髓vegf表达的影响 骨髓造血功能依赖于一个完整的微循环系统, 骨髓微环境中微循环的异常可能影响造血干细胞 (hemopoietic stem cell, HSC) 的增殖和分化。而血管内皮生长因子 (VEGF) 是调控血管生成和造血的重要因子之一。有研究表明, VEGF基因敲除小鼠的HSC生存能力、集落形成和体内增殖率等均明显下降。Gerber HP、Fureder等报道, 再生障碍性贫血 (Aplastic Anemia, AA) 患者骨髓微血管密度和VEGF的表达水平均明显低于正常对照组, 而经HSC移植成功或免疫抑制治疗有效者, 其骨髓微血管密度和VEGF表达水平均较治疗前明显增高, 并伴随造血恢复而血清VEGF水平显著上升。 张莉等比较22例AA患者及10例正常对照者骨髓微血管密度 (MVD) 及血管内皮生长因子 (VEGF) 表达, 也发现AA患者骨髓MVD明显低于对照组, 并且重型AA患者的MVD较非重型AA更低, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。AA患者骨髓VEGF阳性细胞百分率明显低于对照组 (P<0.01) 。经免疫抑制治疗获得疗效的患者骨髓MVD及VEGF阳性细胞百分率均较治疗前明显增加, 提示促进血管生成以及改善骨髓血液循环的药物在免疫抑制治疗的基础上或可加快造血恢复。 张增利使用不同剂量的γ射线全身照射C57BL/6J小鼠, 分别用逆转录多聚酶链反应和酶联免疫吸附法法研究, 结果发现, 对非照射组, 随着骨髓基质细胞体外培养时间的延长, 其VEGF在基因和蛋白水平表达都显著升高。受到5Gy或10Gy射线照射后, VEGF随时间变化的总趋势与非照射组相同。照射组培养6 d, 上清液中VEGF含量高于同时点的非照射组;而在第10天时, 却显著低于同时点的非照射组。分析其原因是5Gy或10Gy射线先期引起骨髓基质细胞VEGF的表达增强可能是机体的一种代偿性反应, 有利于机体造血的重建。但受到照射后培养10 d的骨髓基质细胞数已显著低于非照射同时点的细胞数。 杨龙等将6~8周龄雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、全身照射组、全身屏蔽照射组以及左半身照射组, 以8.0Gy60Coγ射线照射, 观察小鼠外周血白细胞和骨髓有核细胞计数, 检测血清SOD、MDA变化, 用Western blot和免疫组织化学结合激光共聚焦显微镜观察骨髓造血组织VEGF表达的改变。结果在半身照射条件下, 小鼠外周血白细胞降低, 未照射侧骨髓有核细胞计数减少, 血清MDA升高, SOD降低 (与正常对照组比, P<0.01) ;非照射区域骨髓造血组织VEGF表达明显减少, VEGF阳性细胞显著下降 (与正常对照组比, P<0.01) 。说明局部电离辐射作用后, 可导致非照射区域骨髓造血组织增殖抑制, VEGF表达显著减少, 氧自由基激活可能参与了该损伤过程。 1.2 细胞移植对常儿童及胎儿的影响 骨髓基质细胞包括骨髓间质干细胞 (Mesenchymal stem cells, MSCs) 及一些较成熟细胞, 如成纤维细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成骨细胞等, 其通过分泌某些细胞因子调控HSC的生理功能。MSCs是一类具有向中胚层、外胚层及内胚层多种组织细胞分化能力的原始细胞。在体外、体内均可定向分化为成骨细胞和成软骨细胞, 作为骨生成细胞的来源, MSCs是骨组织再生的细胞学基础。AA患儿骨髓来源的MSCs体外生长特征有别于正常儿童及胎儿骨髓来源者, 培养早期与正常儿童及胎儿骨髓来源者有近似的增殖能力, 但当扩增至20群体倍增值时, 长期增殖能力即耗竭, 而正常儿童和胎儿骨髓来源的MSCs却可稳定扩增至30群体倍增值。 MSCs在造血干细胞移植中有多方面作用。它一方面促进造血干细胞植入并促使其沿多系方向分化;另一方面可发挥免疫调节作用, 降低移植物抗宿