不同红豆杉属植物中7种紫杉烷类化合物的HPLC检测与分析.docx

? ? 不同红豆杉属植物中7种紫杉烷类化合物的HPLC检测与分析 ? ? 崔海超, 郑文艺，张智慧，傅岳峰，李欣悦，付玉杰,2，顾成波* (1.东北林业大学 森林植物生态学教育部重点实验室, 林业生物制剂教育部工程研究中心，黑龙江省林源活性物质生态利用重点实验室， 哈尔滨 150040； 2.北京林业大学 林学院，北京 100083) 0 引言 红豆杉属植物为常绿乔木或灌木，全世界有11种。我国有4种和1个变种，分别是中国红豆杉(Taxuschinensis)、云南红豆杉(Taxusyunnanensis)、西藏红豆杉(Taxuswallichiana)、东北红豆杉(Taxuscuspidata)、南方红豆杉(Taxuschinensisvar.mairei)(变种)。此外，还有引种我国的杂交品种曼地亚红豆杉(Taxus×mediacv.hicksii)，其母本为东北红豆杉，父本为欧洲红豆杉(Taxusbaccata)[1]。 红豆杉是我国的一级珍稀濒危保护树种，含有多种药用成分。红豆杉叶可以入药，具有治疗痛经、利尿的功效，主治肾炎浮肿、小便不利和糖尿病等症。紫杉醇(Paclitaxel)是从红豆杉科红豆杉属植物中分离得到的一种四环二萜类生物碱，自1992 年美国FDA批准上市以来，已成为世界上公认的抗癌用药[2]。 紫杉烷类化合物是与紫杉醇合成代谢相关的二萜类化合物的总称，目前从红豆杉属植物中分离出的紫杉烷类化合物已有500余种[3]。除了紫杉醇，三尖杉宁碱(Taxol B)、巴卡亭Ⅲ(Baccatin Ⅲ)、10-去乙酰基巴卡亭(10-DAB)、10-去乙酰基紫杉醇(10-DAT)、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-xyl-10-DAT)和7-表-10-去乙酰基紫杉醇(7-epi-10-DAT)也均是紫杉烷化合物。由于一些紫杉烷类化合物与紫杉醇的结构相似，可作为紫杉烷类药物的半合成原料，通过结构修饰改造成紫杉醇，甚至药效更好的化合物，在抗癌药物合成中具有重要应用[4-5]。 红豆杉属植物中紫杉烷类成分含量极低，同时分析检测多种红豆杉中紫杉烷类化合物较困难。红豆杉不同品种、不同年龄，甚至同一品种的不同提取部位，紫杉烷类化合物的含量均有明显的差异[6-8]。为分析比较不同红豆杉属植物中紫杉烷类物质含量的差异，本研究以3种红豆杉属植物(东北红豆杉、南方红豆杉和曼地亚红豆杉)为研究对象，在建立7种紫杉烷类化合物(紫杉醇、10-去乙酰基巴卡亭、三尖杉宁碱、巴卡亭Ⅲ、10-去乙酰基紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇和7-表-10-去乙酰基紫杉醇)的高效液相色谱(HPLC)检测方法的基础上，对3种红豆属植物中紫杉烷类化合物含量进行了比较分析[9-13]，旨在为红豆杉属植物的质量控制、种源选育、资源的保护与合理开发利用提供依据。 1 材料与方法 1.1 材料 东北红豆杉、南方红豆杉和曼地亚红豆杉主干树皮样品，来源于东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室科研温室内7年生盆栽苗。 标准品紫杉醇、三尖杉宁碱、巴卡亭Ⅲ、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基巴卡亭、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇和7-表-10-去乙酰基紫杉醇对照品(四川省维克奇生物科技有限公司)，纯度均大于98%。色谱级乙腈大于等于99.9%(迪马科技有限公司)，色谱级甲醇大于等于99.9%(迪马科技有限公司)，分析纯甲醇大于等于99.5%(天津市天力化学试剂有限公司)；水为超纯水。 1.2 仪器 Agilent Technologies 1290 infinityⅡ高效液相色谱(美国Agilent公司)，HiQsil C18色谱柱(日本KYATECH公司)，1290VWD紫外吸收检测器(美国Agilent公司)； AB104型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；KQ-250DB型数控超声机(昆山市超声仪器有限公司)；RFA-02L型旋转蒸发仪(上海青浦沪西仪器厂)。 1.3 色谱条件 色谱柱为 HiQsil C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)，考察了乙腈-水、甲醇-水、甲醇-1%体积分数乙酸水溶液和乙腈-1%体积分数乙酸水溶液4种不同流动相体系及4种不同检测波长(227、250、273、228 nm)下各紫杉烷类成分的色谱行为。根据基线分离效果，采用乙腈-水作为流动相；梯度洗脱程序为：0～10 min，30%乙腈；10～12 min，30%～45%乙腈；12～25 min，45%乙腈；25～30 min，42%～45%乙腈；30～40 min，30%～42%乙腈；流速为1 mL/min；检测波长为227 nm(筛选了4种检测波长，最终确定227nm为最佳检测波长)；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。 1.4 对照品溶液制备 分别称取7种紫杉烷