微生物技术部分.ppt

A.系列稀释操作 P19 101 102 103 104 105 106 (1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。 (2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。 (3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。 第三十页，共四十一页，2022年，8月28日 B.涂布平板操作 P19 第三十一页，共四十一页，2022年，8月28日 第三十二页，共四十一页，2022年，8月28日 二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例） 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 倒置培养 观察、记录、分析 保存菌种 高压蒸汽 平板划线法 稀释涂布平板法 恒温培养箱 第三十三页，共四十一页，2022年，8月28日 平板和一个未接种的平板，恒温37℃倒置培养 恒温箱中培养 第三十四页，共四十一页，2022年，8月28日 原液 稀释101倍 稀释103倍 稀释102倍 第三十五页，共四十一页，2022年，8月28日 菌种的保存 （1）临时保藏 固体斜面培养基：4℃，3~6月转接新培养基 （2）长期保藏 甘油管藏： 菌液：灭菌甘油=1：1混合，-20℃ 第三十六页，共四十一页，2022年，8月28日 芽孢 A、某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体，称为芽孢 第三十七页，共四十一页，2022年，8月28日 第一页，共四十一页，2022年，8月28日 （二）无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 1、目的：防止外来杂菌入侵，获得纯净培养物 p15 2、方面：p15 *实验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和消毒 *微生物培养的器皿、接种工具和培养基灭菌 *实验操作在酒精灯火焰附近进行 *避免已经经过灭菌处理的材料与周围物品接触 第二页，共四十一页，2022年，8月28日 比较 含义 常用方法 消毒 使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢和孢子。p15 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。 p15 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌 煮沸消毒法； 巴氏消毒法； 化学药剂消毒； 第三页，共四十一页，2022年，8月28日 煮沸法：家庭常用，如：新买个水杯，奶瓶，拿热水烫一下。SARS的时候，我们都带口罩，有些不是一次性的口罩就每天拿热水煮或烫一下。 巴氏消毒法：牛奶 化学药剂消毒：医院注射之前酒精擦拭 定义 常用方法 处理对象 消毒 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物 煮沸 玻璃仪器 巴氏消毒法 不耐高温的液体 紫外线 实验室、操作台 化学药剂消毒：如酒精溶液 手，操作台等 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 培养基、棉塞、玻璃仪器等 接种环、涂布器 玻璃仪器 3、灭菌与消毒： 高压蒸汽 灼烧 干热 第四页，共四十一页，2022年，8月28日 定义 常用方法 微生物培养和组培中的应用 消毒 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物 煮沸 玻璃仪器 紫外线 实验室、操作台、衣物等 酒精溶液 手、外植体等 次氯酸钠溶液等 外植体 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 高压蒸汽 培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等 灼烧 接种环、涂布器 干热 玻璃仪器 第五页，共四十一页，2022年，8月28日 121℃，100kPa，15~30min 第六页，共四十一页，2022年，8月28日 接种用具、试管口、瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌 第七页，共四十一页，2022年，8月28日 将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内， 160-170 ℃下加热1-2h。 第八页，共四十一页，2022年，8月28日 二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例） 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 倒置培养 观察、记录、分析 保存菌种 第九页，共四十一页，2022年，8月28日 配制培养基 称量 计算 溶化 物质 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 重量 5g 10g 5g 20g 定溶至1000mL 电子天平和称量纸 调节PH 第十页，共四十一页，2022年，8月28日 溶化 营养→琼脂（搅拌）→加水定容→调节PH 第十一页，共四十一页，2022年，8月28日 高压蒸汽灭菌 第十二页，共四十一页，2022年，8月28日 二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例） 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种