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实验酪氨酸酶动力学 第一页，共十页，2022年，8月28日 1. 学会测定酶反应速度的基本方法。 2.掌握测定米氏常数Km值的原理和方法。 【目的和要求】 第二页，共十页，2022年，8月28日 【实验原理】 酪氨酸酶催化的反应为： ?475nm 第三页，共十页，2022年，8月28日 常用单位时间内、产物的浓度增加量表示。 一、酶活力测定— 酶反应初速度的测定: Time Product Concentration v= dC /dt A =εC d ?: 3600 M-1cm-1 d: 1cm 确定酶反应时间！ 第四页，共十页，2022年，8月28日 二、 底物浓度[S]对酶反应速度： 一级反应 混合级反应 零级反应 Effect of substrate concentration on the initial velocity of an enzyme-catalyzed reaction. ? Vmax Km 第五页，共十页，2022年，8月28日 Km值测定: 双倒数作图法 第六页，共十页，2022年，8月28日 （一）酶反应初速度的测定：---酶反应时间的确定 在比色杯中，按下表依次加入试剂： 【实验方法】 加入酶液后立即混匀，并每隔15秒读取475nm处的吸光值。 L-多巴（mL） 1 磷酸缓冲液（mL） 1.97 酪氨酸酶（mL） 0.03 注：酪氨酸酶 5U/?l 第七页，共十页，2022年，8月28日
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