杨树桑黄生物学特性菌种制作菌种检验方法.pdf

杨树桑黄生物学特性菌种制作菌种检验方法 附录A 〔标准性附录〕 杨树桑黄生物学特性A.1 子实体子实体多年生，硬木质，无柄，侧生。 菌盖扁半球形、马蹄形或不规那么形，腹面凸，长径3~21cm，短径 2~12cm，厚1.5~10cm。有黄色翻边，底部亦颜色鲜黄。幼时外表有细绒 毛，后脱落，有明显的龟裂，无皮壳，有假皮壳，有同心环棱。盖面呈灰 褐色、肝褐色至黑色，有光泽;边缘圆钝，龟裂少，有密生的短绒毛，干 后脱落，呈肉桂色至咖啡色。菌肉硬，木质，暗褐色，厚0.5cm左右。菌 管多层，层次常不明显，老的菌管有白色菌丝充塞，管口面锈褐色至酱色， 管口圆形，每1mm间4~5个。刚毛顶端锋利，基部膨大，〔10~25〕μm× 〔5~7〕μm。 A.2菌丝体菌丝为二体型菌丝系统，具有生殖菌丝和骨架菌丝。气生 菌丝多为骨架菌丝，黄色，微螺旋状，直径115~215μm。基内菌丝多为 生殖菌丝，透明，多分支，〔115~215〕μm× 〔5~9〕μm，局部菌丝多短 分支，分支端部膨大呈球形；骨架菌丝很少，壁厚，直径510~515μm。 A.3孢子孢子椭圆形，厚壁，黄色，光滑，〔3.3~4.5〕μm× 〔2.4~3.5〕μm。 附录B 标准性附录〕 杨树桑黄菌种制作B.1感官检验感官要求符合表5的规定。 表表5 菌种感官要求项项 目观察方法试管、菌种瓶〔袋〕、棉塞或硅胶塞、无棉塑料盖、斜面 反面外观肉眼观察培养基上外表距瓶〔袋〕口距离、斜面长度、接种量、 菌种外观肉眼观察和测量杂菌菌落、虫〔螨〕体肉眼观察，或用5×放大 镜观察子实体原基随机抽取样本100瓶〔袋〕，肉眼观察有无原基，并计 算B.2微生物学检验B.2.1菌丝生长状态及锁状联合用放大倍数不低于 10×40的光学显微镜对培养物的水浸片进行观察，每一检样观察不少于 50个视野。 B.2.2细菌检验将检验样本按无菌操作接种于GB/T4789.28 中4.7规 定的营养琼脂培养基中，28℃下培养1d~2d，观察斜面外表是否有细菌菌 落生长，必要时用显微镜检查。 B.2.3霉菌检验将检验样本按无菌操作接种于PDA培养基中， 25℃~28℃下培养3d~4d，观察是否有菌丝形态菌落或有异味，必要时用 水浸片镜检。 B.3菌丝生长速度B.3.1母种PDA培养基，90mm直径培养皿，倾倒培 养基30~35mL/皿，菌龄10d~12d的菌种为接种物，用灭菌的5mm直径打 孔器在菌落周围相同菌龄处打接种物，接种后置于25℃~28℃黑暗培养， 并计算长满平板培养皿生长所需天数。 B.3.2原种和栽培种在选定的培养基上接种后置于25℃~28℃黑暗培 养，并计算长满瓶〔袋〕所需天数。 B.4母种制作B.4.1母种培养基配方配方1：马铃薯200g、葡萄糖 20g、琼脂20g，水1000mL，pH 自然。 配方2：马铃薯200g、葡萄糖20g、酵母浸膏2.0g、硫酸镁0.3g、 琼脂20g，水1000mL，pH 自然配方3：马铃薯200g、葡萄糖20g·L－1、 磷酸二氢钾1g·L－1、维生素B110mg，琼脂20g，水1000ml，pH 自然。 B.4.2制作方法试管规格18mm×180mm或20mm×200mm，无菌接种后 在25℃~28℃条件培养10d~13d长满试管斜面，制作过程应符合NY/T528 的规定。 B.5原种制作B.5.1原种培养基配方配方1：细木屑10％，玉米粒 60％，黄豆粒30％，pH 中性。 配方2：细木屑10％，玉米粒45％，小麦粒45％，pH 中性。 配方3：细木屑10％，玉米粒30％，小麦粒30％，黄豆粒30％，pH 中性。 B.5.2制作方法培养基原料质量应符合NY5099 的要求。使用750mL 容积透明菌种瓶，或16.5cm×38cm乙烯袋，在25℃~28℃条件培养 40d~45d长满菌种瓶〔袋〕。 栽培种制作B.5.3栽培种配方配方1：柞木屑78％，麦麸20％，石 灰粉1%，石膏粉1%，pH 中性。 配方2：柞木屑78％，麦麸15％，玉米粉5%，石灰粉1%，石膏粉1%， pH 中性。 配方3：柞木屑78％，麦麸15％，黄豆粉2.5％，玉米粉2.5%，石 灰粉1%，石膏粉1%，pH 中性。 B.5.4制作方法培养基制作方法同B.2.2。 附录C 〔标准性附录〕 杨树桑黄菌种检