2株依赖海水细菌的分离培养和鉴定-《热带农业科学》(2015年6期).docx

龙源版权所有 2株依赖海水细菌的分离培养和鉴定作者：余中华等来源：《热带农业科学》2015年第06期 摘 要 为提高海洋微生物的可培养性，采用海水需求实验分离海洋细菌的方法，分离出9株严格依赖海水生长的细菌。通过16S rDNA测序及同源性分析发现：菌株HB10001（=CGMCC 1.10781T）与Spongiibacter tropicus DSM19543T的16S rDNA序列同源性最高，为96.3%，其（G+C）含量为66.7 mol%；菌株HB10303与Paenibacillus. agaridevorans DSM1355T的16S rDNA序列同源性最高，為98.4%，其（G+C）含量为45.5 mol%。 关键词 依赖海水；细菌；分离培养 分类号 Q933 Isolation and Characterization of Seawater Required Bacteria YU Zhonghua1，2） LIU Jiayang1） CHEN Fujia1） BAO Shixiang2） （1 Huanghuai University， Zhengzhou， Henan 450000， China 2 Institute of Tropical Biosciences and Biotechnolog Key Laboratory of Ministry of Agriculture for Tropical Biotechnology， CATAS， Haikou， Hainan 571101， China） Abstract In order to increase the cultivability of seawater-required bacteria， 9 strains were isolated for their seawater requirements. strain HB10001（=CGMCC 1.10781T） had the highest sequence similarity with Spongiibacter tropicus DSM19543T（96.3%）. The G+C content is 66.7 mol%. Strain HB10303 had the highest sequence similarity with Paenibacillus agaridevorans DSM1355T（98.4%）. The G+C content is 45.5 mol%. Keywords seawater required ； bacteria ； isolation 海洋微生物对海水中盐的组分和浓度有不同程度的依赖性，因此，在设计培养基时，需要考虑海盐对海洋微生物生长的影响[1]。有些海洋微生物的培养离不开海水，所以在培养基中添加海水是必不可少的。Mincer[2]发现的海孢菌Marinospora spp.和盐孢菌Salinispora spp.只能在海水配制的培养基上生长。Han等[3]从阿穆尔斯基海湾中分离到的Salinibacterium amurskyense gen. nov. sp. nov是Microbacteriaceae的一个新属。这类菌株能耐受浓度高达10%的NaCl，不过NaCl对其生长则并非必需，说明该菌株对海洋环境有良好的适应性。Tsueng等[4]对海水中的阳离子及离子强度对Salinispora的3个种S. pacifica，S. arenicola和S. tropica生长的影响进行了初步研究，结果表明，钙离子和二价镁离子及某些特定的离子强度对于Salinispora spp.的生长是必需的。Zhang等[5]采用5种不同培养基，分别对5种海绵中可培养放线菌进行分离，证明培养基对可培养微生物的数量有显著影响；其中，在无机盐成分最为丰富的M3培养基上分离到的菌群也具有最大的多样性。 本研究针对海洋细菌的特殊生存进化环境，通过在R2A寡营养培养基中添加海水、纯水及NaCl溶液模拟海洋环境，提高海洋微生物的可培养性，最大程度地分离培养依赖海水的细菌，并分离出新的未培养细菌。同时，利用多相分类方法对分离出来的细菌进行系统分类和鉴定，探明它们的种属特性和系统发育学地位，进一步丰富海洋微生物资源库，以期为后期新基因、新化合物研究奠定基础。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 海洋细菌分离培养基 R2A培养基（海水）：0.05 g细菌学蛋白胨，0.05 g酵母粉，0.05 g可溶性淀粉，0.05 g葡萄糖，0.05 g酸水解酪素，0.03 g丙酮酸钠，1.5 g琼脂粉，100 mL海水，pH