香菇胞外多糖的化学结构与抗氧化活性-《江苏农业科学》(2016年12期).docx

龙源版权所有 香菇胞外多糖的化学结构与抗氧化活性作者：元向东来源：《江苏农业科学》2016年第12期 摘要：利用高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）和红外光谱（IR）分析法等对香菇（Lentinus edodes）发酵液中香菇胞外多糖（exopolysaccharides，EPS）2种组分EPS-1、EPS-2的化学结构进行特征分析，测定其抗氧化活性。结果表明，EPS-1的单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖和甘露糖，其摩尔比为1.7 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]3.0；EPS-2的单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖，其摩尔比为7.2 ∶[KG-*3]2.3 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]8.4；EPS-1、EPS-2均有较强的抗氧化活性，EPS-2 体外抗氧化活性相对更强。 关键词：香菇；胞外多糖；化学结构；抗氧化 中图分类号： R284.1文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）12-0313-03 收稿日期：2015-12-30 作者简介：元向东（1970—），男，河南安阳人，硕士，讲师，主要从事生物技术及分析研究。E-mail163.com。 香菇（Lentinus edodes）别称花菇，世界第二大真菌门侧耳科香菇属（Lentinus）食用菌，口味鲜美，营养丰富，富含多糖、维生素、蛋白质、多元酚、朴菇素、膳食纤维等多种生物活性物质，其中，香菇多糖具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、保肝护肝和降血糖等作用[1-2]。液体发酵是目前真菌发酵中应用较为广泛的一项技术，具有可以工业化连续生产、规模大、产量高、发酵周期短、生产效益高等优点，除在液体发酵过程中产生大量菌丝或孢子外，还会在发酵液中分泌多糖、多肽等具有生理活性的物质。本研究采用DEAE-52纤维素柱和G-100葡聚糖，对香菇发酵液中的胞外多糖（exopolysaccharides，EPS）进行分离纯化，得到EPS-1、EPS-2等2种组分。在此基础上，采用高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）和红外光谱（IR）分析法等分别分析这2种组分的分子量、单糖组成、键型和抗氧化活性，以期为香菇液体的深层发酵及香菇胞外多糖的开发利用提供参考。 1材料与方法 1.1材料、试剂与仪器 1.1.1菌株与培养基供试菌种香菇由内蒙古农业科学院真菌研究所保存并提供。深层液体种子培养基：马铃薯 200 g、葡萄糖20 g、KH2PO4 1 g、MgSO4·7H2O 1 g、维生素B1 0.1 g、水1 L，自然pH值，于摇床25 ℃、160 r/min振荡培养 10 d。深层液体发酵培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、KH2PO4 1 g、MgSO4·7H2O 1 g、维生素B1 0.1 g、蛋白胨3 g、酵母粉3 g、水1 L，自然pH值，100 L气升式液体深层发酵罐中培养14 d，发酵温度为25 ℃，连续通入无菌空气。 1.1.2试剂30% H2O2，由天津市凯通化学试剂有限公司生产；95%乙醇，由天津市百世化工有限公司生产；DPPH、DEAE-52纤维素、葡聚糖G-100，由Sigma公司生产；苯酚，由天津市天大化学试剂厂生产；浓硫酸、浓盐酸，由淄博化学试剂厂有限公司生产；三氯乙酸，由天津大茂化学试剂厂生产。 1.1.3仪器752-N紫外可见分光光度计、DK-S24型恒温水浴锅、DZF-6021型真空干燥箱，均由上海精宏实验设备有限公司生产；GC2010气相色谱仪，由日本岛津公司生产；Nicolet380傅立叶变换红外光谱仪，由美国热电集团生产；TDL-5-A型台式离心机，由上海安亭科学仪器厂生产；LXJ-68-02型离心机，由北京医疗仪器修理厂生产；1260型高效液相色谱仪，由美国安捷伦科技有限公司生产。 1.2多糖的提取 将香菇的发酵液离心，除去胞外产物；用旋转蒸发仪浓缩，加入3倍体积的95%无水乙醇；4 ℃醇沉24 h，3 500 r/min 离心20 min；弃去上清液，将获得的沉淀真空冷冻干燥即得胞外多糖。 1.3多糖组分的测定 采用DEAE-纤维素离子交换柱对EPS组分进行分析：用浓度梯度为0.2、0.5、1.0 mol/L的NaCl溶液进行洗脱，洗脱速度控制在1 mL/min；每个洗脱梯度收集25支试管，每支试管收集2 mL，采用苯酚-硫酸法[3]测定收集溶液的多糖浓度，绘制洗脱曲线。采用葡聚糖G-100凝胶柱对多糖组分进行纯度鉴定[4]：用0.1 mol/L NaCl溶液充分平衡层析柱，用蒸馏水作为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度控制在0.1 mL/min；每支试管收集 2 mL，采用硫酸-苯酚法测定收集溶液的多糖浓度，绘制洗脱曲线。 1.4EPS 2种