北海道黄杨叶片离体培养及其细胞耐盐性-《江苏农业科学》(2016年12期).docx

龙源版权所有 北海道黄杨叶片离体培养及其细胞耐盐性作者：孙宁 王赫 陈小强 李凤来源：《江苏农业科学》2016年第12期 摘要：以北海道黄杨叶片为材料进行愈伤组织诱导及细胞增殖培养试验，同时开展不同浓度NaCl胁迫下愈伤组织培养，探讨外源激素对叶片离体培养的影响及其愈伤组织的耐盐性。结果表明，北海道黄杨叶片诱导愈伤组织最适培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.3 g/L，有利于愈伤组织增殖的激素为2，4-D 0.5 mg/L；0.2% NaCl胁迫对愈伤组织生长影响较小，NaCl浓度高于0.4%时，随盐浓度升高愈伤组织脯氨酸含量增加，生长量急剧降低。 关键词：北海道黄杨；愈伤组织；激素；盐胁迫 中图分类号：S792.119.04文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）12-0096-02 收稿日期：2015-10-20 基金项目：天津市高等学校创新团队（编号：TD12-5017）；国家级大学生创业训练计划（编号：201410061114）；天津市学院精品课程建设（植物细胞工程）。 作者简介：孙宁（1979—），女，河北承德人，硕士，高级实验师，从事生物技术方面的研究与教学。E-mail：sning79@。 北海道黄杨（Euonymus japonicus L.）是卫矛科卫矛属的常绿阔叶乔木，它具有极强的耐寒性，能耐-23.9 ℃低温[1]。北海道黄杨具有树体高大挺拔、四季常青、冬天有红果可供观赏等特点，同时还有较强的净化空气的效果，适合作为绿化美化环境树种[2]。 我国盐碱地总面积约3 460万hm2以上，耕地盐碱化760万hm2，大约20%的土地发生盐碱化[3]。我国盐碱地主要分布在东北、华北的农产区，特别是经济比较发达的沿海城市和生态环境比较脆弱的西北内陆区域。要改变这些盐碱地区温带城市中落叶树种比较单调的模式，发展多层次的城市绿化，需要多种四季常青、环境污染小的耐盐树种。 [JP2]通过植物组织培养技术筛选培育耐盐性相对比较高的植物品种是提高盐碱地的利用率、减少土地浪费的有效解决方法之一。目前，国内外对北海道黄杨的离體培养已有部分研究，但大多集中在离体快繁方面，而利用愈伤组织培养来开展抗性育种研究极少。开展北海道的离体叶片愈伤组织培养及离体细胞盐胁迫研究，可为筛选北海道黄杨耐盐细胞系及抗盐突变株的选育奠定基础，并可为植物抗盐育种研究提供理论支持。 1材料与方法 1.1试验材料 以完整无受损病虫的北海道黄杨新生叶片为试验材料。 1.2试验方法 1.2.1外植体消毒将叶片用流水冲洗30 min，无菌条件下在75%乙醇中浸泡30 s后，用无菌水冲洗3次，再用0.1%氯化汞浸泡6 min，后用无菌水清洗4～5次。将叶片放置于无菌滤纸上吸干水分，剪为1 cm2左右带叶脉的方形叶块，叶背向下平铺接种于不同配方的培养基上。 1.2.2初代培养试验基本培养基采用MS（蔗糖30 g/L、琼脂6.3 g/L，pH值5.8左右），附加不同浓度的6-BA、NAA、2，4-D，共设10个处理。培养温度25 ℃，光照强度1 200～1 500 lx，光照时间12～14 h/d。接种后每隔7 d观察统计1次诱导率。 1.2.3愈伤组织增殖培养无菌条件下将叶片四周长出的愈伤组织切下，用刀片压碎至小颗粒状，均匀接入到继代增殖培养基中。基本培养基采用MS（蔗糖30 g/L、琼脂6.3 g/L，pH值为5.8左右），附加不同浓度的NAA、2，4-D，共设6个处理。培养温度25 ℃，暗培养。接种后每隔7 d观察1次愈伤组织变化。 1.2.4愈伤组织盐胁迫培养将增殖培养获得的愈伤组织称重记录后，按“2.2.3”节方法均匀接种···试读结束