生防菌NH-8及其高效突变体诱导番茄抗性的比较-《江苏农业科学》(2021年7期).docx

龙源版权所有 生防菌NH-8及其高效突变体诱导番茄抗性的比较作者：李德全 汪宝华 曹云英 邓自发来源：《江苏农业科学》2021年第07期 摘要：在比较枯草芽孢杆菌NH-8及其突变体B2、H7抑菌活性的基础上，以苏粉8号番茄幼苗为试材，比较枯草芽孢杆菌NH-8及其高效突变体对番茄幼苗生长、抗性酶活性的影响。结果表明，NH-8菌株及其高效突变菌株对番茄生长具有明显的促进作用，接种H7菌株的番茄幼苗其幼苗株高、主茎高度、鲜质量、干质量分别为42.50 cm、282 cm、1498 g/株、4.65 g/株，较清水对照增加73.04%、276.00%、77.28%、100.43%;2个高效突变菌株的拮抗能力较枯草芽孢杆菌NH-8有所提高，其促生作用和诱导抗性酶活性大多相应增强;接种生防菌株H7的番茄叶片过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶活性相对最大，分别为4.5、55.5、47.6、14.7 U。 关键词：枯草芽孢杆菌NH-8;突变体;番茄;抗性酶;酶活性;抗性诱导 中图分类号： S641.201文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2021）07-0111-04 收稿日期：2020-07-09 基金项目：江苏省南通市应用基础研究项目（编号：M;南通大学重点项目（编号。 作者简介：李德全（1975―），男，江苏丰县人，博士，副教授，从事生物防治和抗性生理研究。E-mail：lidequan@ntu.edu.cn。 芽孢杆菌为芽孢杆菌科、芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，既能产生芽孢以抵抗各种化学和物理的胁迫，又能产生多种抗菌活性物质抑制病原物，促进植物生长，在植物病害生物防治中应用广泛[1-5]。诱导植物产生抗病性保护是植物产生主动抗性的一种表现，经典抗性诱导是在植物体上先接种病原菌或诱导物，导致在接种部位产生病斑，进而产生系统抗病性，而多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）等酶的活性大小往往与植物抗性强弱有密切关系[6-9]，可用于指征植物对病原菌的抗性能力。 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）NH-8是从近海海藻分离筛选到的具有良好抑菌活性的产芽孢杆菌[10]，生长快，能产生抗生素，对多种植物病原生物具有较强的拮抗作用，是一种能在植物病害防治中发挥重要作用的生物防治因子[11]。本试验利用比单一诱变更为有效的氮离子注入法[12]对海洋细菌NH-8进行诱变处理，筛选获得2株拮抗性能比菌株NH-8更为高效的突变体;在此基础上，以苏粉8号番茄幼苗为试材，测定接种生防菌NH-8和2株高效突变菌株的番茄叶片多酚氧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶等活性水平，并分析比较其对番茄幼苗的控病促生作用，旨在明确生防菌NH-8和2株突变菌株的诱抗能力，为评价该生防菌株的应用价值、生防作用机制及对植物病害的有效防治提供新途径。 1 材料与方法 1.1 材料 枯草芽孢杆菌NH-8及其高效突变菌株B2、H7、小麦纹枯病原菌，由南通大学生命科学学院实验室保存提供，供试番茄品种为苏粉8号。 1.2 试验时间、地点 田间盆栽试验于2019年2—5月选择在南通大学植物试验园进行，室内试验在南通大学生物技术重点实验室进行。 1.3 菌株NH-8及其高效突變株的抑菌活性比较 以小麦纹枯菌为指示菌，采用平板对峙法验证抑菌活性，其具体操作过程：将菌株NH-8及其2株突变菌株分别移植到牛肉膏、蛋白胨液体培养基中，26℃、140 r/min振荡培养36 h，备用;将纹枯病病原菌移植到直径为90 mm的PDA平板上，26 ℃培养48 h;打孔器打孔，将菌块移植到直径为90 mm的空白PDA平板中央培养8 h，对角接种NH-8及其2株高效突变体，26 ℃培养48 h;测量接种菌株的菌圈直径，计算抑制率，重复6次。抑制率计算公式： 抑制率=菌圈直径/45×100%。 式中：45为平板半径值，mm。 1.4 菌株NH-8及其高效突变菌株对番茄生长的影响 选取生长相对一致的番茄幼苗，移栽到按顺序摆放、装有灭菌土的塑料盆中，每盆移栽1株，接种菌含量为1010 CFU/mL的菌株NH-8及其高效突变菌株发酵液250 mL/株，分别以空白培养基、清水处理为对照，移栽后15、25 d再用相应的溶液处理1次;定植后30 d，每处理随机选择5点，每点选取番茄6株，取出植株，用自来水洗净，晾干;分别采用直尺、游标卡尺测量株高、短缩茎粗度，采用电子秤称量植株的鲜质量、干质量;称量干质量时，将番茄植株在烘箱中55 ℃烘干。每次处理试验植株数为30株，重复4次。 1.5 番茄叶片抗性酶活性的测定 1.5.1 接种处理 以番茄幼