FISH技术在血液肿瘤中的应用.ppt

鉴别诊断，以BCR/ABL探针为例： 额外信号的BCR/ABL探针（ES） 根据荧光信号的模式不同，可以鉴别MBCR断裂点（P210）和mBCR断裂点(P190)。 MBCR断裂点的细胞呈现1Y/2R/1G的信号模式，而mBCR断裂点的细胞则是2Y/1R/1G的信号模式。 一、鉴别诊断 一、鉴别诊断 双色双融合信号探针（DF）—虽不能区分MBCR和mBCR，但能检测der（9）的部分序列缺失。 ABL和BCR基因同时缺失：1R/1G/1Y ABL基因单独缺失： 1R/2G/1Y 。 ES探针却无法检测der（9）的部分序列缺失，其信号均显示1R/1G/1Y 。 一、鉴别诊断 IgH-CCND1 男性，54岁患者，左颌下肿块2月余 白细胞增高（21.3×109/L） 骨髓涂片见到增生活跃，以成熟淋巴细胞增生为主，考虑慢性淋巴细胞白血病。 流式分析显示CD5+CD19+细胞占86.5%，以CD19+的细胞群设门，CD23+细胞约占16.3%。 FISH检测患者外周血，约50%的圆形细胞显示融合信号，提示套细胞淋巴瘤可能性大。 病理证实了左颌下淋巴结非霍奇金套细胞淋巴瘤。。  CLL中的应用 CLL的细胞大多处于间期，有丝分裂活性较低，细胞往往不分裂，即使分裂的细胞绝大多也是正常核型，核型分析的异常检出率很低。 CLL的遗传学异常被认为与存活期有关： 正常核型和13q-预后相近 +12、11q-和17p-的预后均较差 二、治疗和预后分层 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 荧光原位杂交（FISH）在血液肿瘤中的应用 FISH的定义 荧光原位杂交（FISH）是20世纪八十年代在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的新技术。它利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记或先以生物素或地高辛等半抗原标记后与靶DNA进行杂交，再通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物，最后在荧光显微镜下观察杂交信号，从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析。 FISH技术原理 FISH技术原理 FISH技术原理 FISH技术原理 FISH技术原理 FISH技术原理 FISH技术原理 FISH的种类 间期FISH（Interphase FISH） 染色体涂染分析（Chromosome painting） 多色FISH（Multicolor-FISH） 反向涂染（Reverse painting） 比较基因组杂交（Comparative genomic hybridization） FISH探针的种类和用途 着丝粒探针 用于检测染色体数目异常如三体、单体等。 亚端粒探针 靠近端粒的200-300Kb为染色体特异性DNA，用于检测 涉及端粒的隐匿性易位。 染色体臂或整条染色体涂染探针（WCP） 用于检测染色体易位和标记染色体。 序列特异性探针 包括臂、带和基因探针等多种，用于检测基因缺失和重排。 血液肿瘤FISH检测常见探针类型 双色双融合探针（DC，DF） 额外信号探针（ES） 分离探针（BRK） FISH在血液肿瘤中的应用 检测样本可以是血液、骨髓、石蜡切片 诊断和鉴别诊断 治疗和预后分层 监测疗效（微小残留病灶检测） 识别移植后骨髓细胞来源 一、诊断和鉴别诊断 核型分析缺点： 有丝分裂象少或缺如 染色体质量低劣，显带不佳 染色体异常复杂 分子生物学检测不足： 常见的转录序列来设计引物，扩增的片段长度一般在100 ～ 700bp之间 mRNA剪切方式比较特殊，假阴性结果，易造成漏诊或误诊 一、诊断和