微生物学第二章 微生物的纯培养和显微技术.pptx

第二章 微生物的纯培养和显微技术;一、微生物的分离和纯培养; 培养平板（culture plate，也称平板或平皿）：溶化的培养基倒入无菌空平皿中，冷却凝固后盛有培养基的平皿。 （1）涂布平板法（Spread plate method） 适于大多数好氧微生物。;（2）稀释倒平皿法（Pour plate method）; （3）平板划线法（Streak plate method） 适于大多数非蔓延性的微生物。; （4）稀释摇管法（dilution shake culture method） 不常用，适于厌氧微生物的分离。 3.单细胞或单孢子分离 在显微镜下或显微操纵仪下，用毛???管或机械手选取单个细胞或单孢子。;4.用液体培养基分离纯培养物 主要采用稀释法，适于许多原生动物及藻类。 5.选择培养分离 设计特定的环境条件，使之适合所需微生物的生长，从而使所需微生物能从自然界混杂的群体中分离得到。 （1）利用选择培养基进行直接分离 （2）富集培养：利用不同微生物间生命活动特点的不同，在特定条件下使仅适应于该环境的微生物旺盛生长，从而增加其在群落中的数量，以便从自然界中分离得到所需微生物。 6.二元培养物 只含有两种微生物，且有意识保持二者之间关系的培养物，这是具有寄生、共生关系微生物的最有效保存途径。;选择培养基分离法;7.微生物保藏技术 微生物纯培养物必须通过各种保藏技术使其在一定时间内不死亡、不被污染、不变异、生物学性状不丢失，以保证微生物学研究及应用工作顺利进行，因而微生物保藏技术也是保护微生物资源的一项重要基础工作。 （1）菌种保藏技术的原理：根据微生物生理、生化特点，人工创造条件，是微生物的代谢处于不活泼，生长繁殖受抑制的休眠状态；主要三个条件是：低温、干燥和缺氧。 （2）保藏方法 ①传代培养保藏：斜面，半固体穿刺，液体等，可密封后冷藏。 ②沙土保藏：霉菌孢子及产芽孢细菌。 ③真空冷冻干燥法保藏 ④冷冻法：低温冷冻（-20℃），超低温，液氮；液体培养物中常加15%左右甘油，速冻后保藏。 ⑤其他保藏方法：曲法，麦粒法，无水硅胶法等。;1995年7月1日起，布达佩斯条约国际保藏成员单位 中国微生物菌种保藏委员会（CCCCM，China Commission of Culture Collection of Microbe）：中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC，China General Microbiological Culture Collection Center）。 中国科学院典型培养物保藏委员会（TCCCAS， Type Culture Collection of China Academic Science）：中国典型培养物保藏中心（CCTCC， China Center for Type Culture Collection）。 美国典型菌种保藏中心（ATCC，American Type Culture Collection） 美国北部地区研究实验室（NRRL，Agricultural Research Service Culture Collection） 荷兰霉菌中心保藏所（CBS，Central Bureau voor Schimel Cultures） 英国国家典型菌种保藏中心（NCTC，National Collection of Type Culture） 日本大阪发酵研究所(IFO); 分辨率：能辨别两点之间最小距离的能力。 反差：样本区别于背景的程度。 1.显微镜的种类及原理 （1）普通光学显微镜：主要由物镜、目镜和聚光镜三部分组成光学系统。 最大放大倍数1600倍； 分辨率0.2μ，与光波波长、物镜数值孔径相关，用Abbe公式表示d=0.61λ/nsinθ；n:物镜与物体间介质折射率； θ：光束进入物镜的半角（镜口角）； nsinθ：数值孔径NA（Numerical Aperture）。; （2）暗视野显微镜 普通光学显微镜属于透射照明，即照明光线直接进入视野。采用特殊的聚光器，实行斜射照明，样品反射后的照明光线进入物镜，视野是暗的，样品是明的，反差增大。实体显微镜或解剖镜。; （3）相差显微镜（Phase contrast microscope） F.Zernike发明，基本原理是：光线通过不同折射率和厚度的标本时，直射光和衍射光的光程有差别，加快或落后的相位发生变化—产生相差，通过环状光澜和相位板，利用光的干涉现象，把