基因操作技术.pptx

基因操作技术; 第一节 DNA 克隆 1 DNA 克隆 克隆是指遗传上同一的生物体群体或由无性繁殖所产生的无性繁殖系(如株系, 细胞系, 菌株) DNA克隆是指含有相同DNA分子或DNA片段的的细胞群体、 通过分离基因组DNA, 扩增某个特定DNA片段, 转化到受体细胞中增殖,可制备出一个特定DNA克隆、 DNA制备是DNA克隆及其他DNA操作的第一步骤、 DNA克隆的基本程序如下:; DNA提取 → 分离和扩增特定DNA片段(PCR) 载体连接 ↓ ↓ 重组体DNA ↓转化宿主细胞 ↓ 细胞培养(细胞克隆) 克隆筛查↓(分子杂交) ↓ 靶DNA克隆 ↓ 表达分析与功能分析 ;1、1 DNA 制备 (提取) 组织细胞 ---→研磨破细胞 ---→ 萃取 ↓ ↓ 离心 ↓ 分离 ↓ 纯化 ↓ DNA 样品;;1、3 转化 转化是把外源DNA(重组体DNA)转移到宿主细胞中复制的过程。 靶DNA 重组载体 转化细胞 分子克隆 载体DNA; ; ;3 DNA 文库 DNA文库由一个基因组的全部DNA克隆所构成, 每个DNA克隆含有基因组DNA(基因组文库)或总cDNA (cDNA文库)的一个随机片段、 ? 基因组文库: 基因组DNA → 随机片段 → 重组体DNA → 转化 ↓ 基因组DNA克隆