细胞培养技术实验报告-细胞培养过程中的清洗包装灭菌2021204198李泽.docxVIP

西北工业大学生命学院 实验报告 实 验 课 程 细胞培养技术 实 验 名 称 细胞培养过程中的清洗包装灭菌 姓 名 李泽 学 号 2021204198 班 级 21215-1 专 业 生物学 分 组 成 员 实 验 地 点 生命学院 指 导 教 师 党凯 时 间 2021.12.31  实验名称：细胞培养过程中的清洗包装灭菌 实验目的 1.掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。 2掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。 3.掌握除菌滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。 实验原理 离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，达到不含任何残留物的要求。 微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因，因此细胞培养用品在培养细胞前，要消毒或灭菌。对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。 实验器材及试剂 1.玻璃器皿:培养皿(3) 25mL培养瓶(2) 100mL培养瓶(4) 尖吸管（5) 5mL或10mL移液管(3)血球计数板（1)青霉素小瓶(3) 盐水瓶（1) 离心管（2) 100mL烧杯（1) 250mL烧杯（1） 50或100mL玻璃注射器 2.金属器械: 解剖刀（1) 大号圆头镊（1) 眼科剪(3) 眼科镊(3) 100目金属筛网（1)正压除菌滤器 3.其他 5mL一次性注射器(5)金属饭盒（1)、记号笔、纱布、牛皮纸、剪刀 四、试剂和材料 5%盐酸洁液（酸液) 0.5mol/L NaOH、三蒸水、75%酒精、0.5mol/L HCI 实验步骤 (一）清洗 1．玻璃器皿的清洗 (1)清洗要领 玻璃器皿的清洗是组织培养中工作量最大、质量要求最严格的。不仅要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质，最终冲洗后器皿内外应无水珠积聚。为保证达到这一目的，玻璃器皿的清洗应按以下清洗程序认真执行，包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。 ①浸泡新购进的玻璃器皿和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以便去除玻璃器皿表面的灰尘和软化、溶解掉附着物。新购的玻璃器皿表面常呈碱性，并带有许多干涸的灰尘和一些对细胞有毒的物质(如铅、砷等）。使用前先用自来水简单冲刷，再浸入稀盐酸溶液（5%）浸泡过夜来中和其中的碱性物质。用过的玻璃器皿常常附有大量的蛋白质，干涸后难于刷洗掉，因此用后要立即浸入清水中，并注意让水灌满瓶皿，以利充分浸泡、冲洗。对已用过且有污染的器皿必须先消毒灭菌后再浸泡、冲洗。 ②刷洗应选用软毛刷沾优质的洗涤剂洗刷，不宜用力过大和刷洗次数太多，否则会损害器皿表面的光洁度，影响细胞生长、分布，更不能使用含沙粒的去污粉和劣质洗衣粉。用过的玻璃器材经自来水冲洗后。侵入水中煮沸，然后将适量洗涤剂（洗洁精或洗衣粉)投人沸水中继续煮沸10-30分钟，趁热刷洗器皿内外，刷洗后浸入清水中进行冲洗。 ③酸泡刷洗好的玻璃器材干燥后置清洁液中浸，浸泡时间按器皿L的清洁度来决定，至少应浸泡过夜。浸泡时，器皿内要充满清洁液，勿留气泡。清洁液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成对玻璃器皿无腐蚀作用，去污能力很强。操作时应注意安全，须穿戴耐酸的围裙和手套，保护好面部、眼睛和身体裸露部分。经清洁液处理后的容器必须彻底冲洗，否则对细胞生长不利。 ④冲洗刷洗和浸酸后均应用水充分、彻底地清洗，不留任何残迹。用洗涤装置可保证冲洗效果，节省人力。若用手工操作，需每瓶都用水灌满，倒掉，重复10-20次，最后同样用蒸馏水漂洗3次以上，晾干备用。 (2)清洗步骤 冲洗，浸泡，煮沸加洗衣粉再煮30分钟，立即刷洗，流水振荡冲洗15-20遍，50℃烤干，清洁液浸泡24小时以上，流水冲洗15-20遍，，蒸馏水冲洗4次以上，50℃烤干。 (3）清洗注意事项和要求 ①使用后的实验器材应立即投人清水中 ②浸泡、酸泡、煮沸的器皿内要充满液体。 ③刷洗、酸泡后的器材要用流水振荡冲洗不得有气泡。不得残留洗涤剂、清洁液。方法是:每瓶灌2/3容积的自来水，振荡后倒掉，重复15—20次（尖滴管置量杯中冲洗）。④煮沸的水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂（直径35厘米的铝锅。用洗衣粉10克左右）.若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂，均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化，pH值上升。 ⑤软毛刷的刷瑞已掉毛的应该丢掉，否则会损害玻璃玻璃划痕处易残留洗涤剂，会改变培养液pH和毒害细胞。 ⑥清洁物品应及时包装消毒，应注意妥善保存，防防止落入灰尘、蜂螂、蚂蚁等引起次的污染。 ⑦使用后的胶寒与玻璃器材问时煮洗时，胶塞要放在煮锅的底部。 ⑧浸泡器材的蒸馏水容器要专用，并做好标记，如“蒸馏水Ⅰ盆”，“蒸馏水Ⅱ盆”⑨器材清洗干燥后，在以后各步操作时，手指不可