薄层色谱法测定食品中糖精钠的含量 .docxVIP

PAGE PAGE 1 薄层色谱法测定食品中糖精钠的含量 1．原理样品经处理除去蛋白质、果胶、CO2、酒精等杂质后，在酸性条件下，用乙醚提取食品样品中的糖精钠，经薄层层析分别后用溴甲酚绿一溴甲酚蓝混合指示剂显色后，与标准样品的斑点举行比较定性。在经薄层色谱分别、显色后与标准比较，举行半定量测定。适用于食品中糖精钠的测定，为《食品中糖精钠的测定》的其次法。2．试剂(1)乙醚不含过氧化物。(2)无水硫酸钠。(3)无水乙醇及乙醇(95％)。(4)聚酰胺粉200目。(5)盐酸(1+1)取100mL盐酸，加水稀释至200mL。(6)绽开剂如下①正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)。②异丙醇+氨水+无水乙醇(7+l+2)。(7)显色剂溴甲酚紫溶液(0.4g／L)：称取0.04g溴甲酚紫，用乙醇(50％)溶解，加氢氧化钠溶液(4g／L)1.1mL调制pH为8，定容至100mL。(8)硫酸铜溶液(100g／L)称取10g硫酸铜(CuSO4．5H2O)，用水溶解并稀释至100mL。(9)氢氧化钠溶液(40g／L)。(10)糖精钠标准溶液精确?????称取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇(95％)稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1mg糖精钠(C4H4CONNaSO2·2H2O)。3．仪器(1)玻璃纸生物制品透析袋纸或不含增白剂的市售玻璃纸。(2)玻璃喷雾器。(3)微量注射器。(4)紫外光灯波长253.7nm。(5)薄层板10cm×20cm或20cm×20cm。(6)绽开槽。4．分析步骤(1)试样提取①饮料、冰棍、汽水：取10.0mL匀称试样(如试样中含有二氧化碳，先加热除去。如试样中含有酒精，加4％氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去)，置于100mL分液漏斗中，加2mL盐酸(1+1)，用30、20、20mL乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用5mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，加2.0mL乙醇溶解残留物，密塞保存，备用。②酱油、果汁、果酱等：称取20.0g或吸取20.0mL匀称试样，置于100mL容量瓶中，加水至约60mL，加20mL硫酸铜溶液(100g／L)，混匀，再加4.4mL氢氧化钠溶液(40g／L)，加水至刻度，混匀，静置30min，过滤，取50ml，滤液置于1．50mL分液漏斗中，以下按①中自“加2mI．盐酸(1+1)……”起依法操作。③固体果汁粉等：称取20.0g磨碎的匀称试样，置200mL容量瓶中，加100mL水，加温使溶解、放冷，以下按②中自“加20mL硫酸铜溶液(100g／L)……”起依法操作。④糕点、饼干等蛋白、脂肪、淀粉多的食品：称取25.0g匀称试样，置于透析用玻璃纸中，放人大小适当的烧杯内，加50mL氢氧化钠溶液(0.8g／L)。调成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mL氢氧化钠溶液(0.8g／L)的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。量取125mL透析液(相当12.5g试样)，加约0.4mL盐酸(1+1)使成中性，加20mL硫酸铜溶液(100g／L)，混匀，再加4．4mL氢氧化钠溶液(40g／L)，混匀，静置30min，过滤，取120mL(相当10g试样)，置于250mL分液漏斗中，以下按①中自“加2mL盐酸(1+1)……”起依法操作。(2)薄层板的制备称取1．6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约7.0mL水，研磨3～5min，立刻涂成0.25～0.30mm厚的l0cm×20cm的薄层板，室温干燥后，在80℃下干燥1h，置于干燥器中保存。(3)点样在薄层板下端2cm处，用微量注射器点l0μL和20μL的样液两个点，同时点3.0、5.0、7.0、10.0止糖精钠标准溶液，各点间距1.5cm。(4)绽开与显色将点好的薄层板放人盛有绽开剂的绽开槽中，绽开剂液层约0.5cm，并预先已达到饱和状态。绽开至10cm，取出薄层板，挥干，喷显色剂，斑点显黄色，按照试样点和标准点的比移值举行定性，按照斑点色彩深浅举行半定量测定。(二)糖精钠定性检测1．取试样约20mg，加间苯二酚约40mg，混合后加硫酸l0滴，用微火加热，至显深绿色，放冷，加水10mL与过量的氢氧化钠溶液即成绿色有荧光的溶液。2．取铂丝，用盐酸潮湿后，蘸取试样，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。