假单胞菌荧光铁载体Pvd性质的体外研究.pdf

假单胞菌荧光铁载体 Pvd 性质的体外研究 【摘要】：Pvd(Pyoverdine),又称荧光铁载体 ,承载着细菌中铁的运输功 能,是许多细菌在缺铁条件下 ,合成并释放到环境中的一种对铁离子有 很高亲和力的低分子量化合物 ,使得它们溶解环境中的铁离子并递送 到细菌细胞中去满足细菌对铁的需求。 假单胞菌的致病机制与铁的吸 收、调控有关 ,而铁的吸收、调控过程又与荧光铁载体 Pvd 密切相关。 假单胞菌的致病过程是很复杂的 ,虽然已取得了广泛的研究成果 ,但由 Pvd 参与的铁吸收、调控过程中很多细节仍有待于进一步研究。本文 选用荧光假单胞菌荧光铁载体 Pvd、稀土离子 Tb3+和牛血清白蛋白 BSA、人血清白蛋白 HSA 、伴清蛋白 apoOTf 三种蛋白质为研究对象 , 从以下方面研究了 Pvd 与 Tb3+的相互作用、结合 Tb3+ 前后 Pvd 和 Pvd-Tb 与三种蛋白质之间的相互作用。首先 ,用分子生物学技术对绿 脓杆菌 ATCC15692(PAO1)诱导、表达、纯化得到了 Pvd。其次 ,荧光 猝灭法和配体竞争法研究表明 ,Pvd 可以与 Tb3+ 以 1：1 的化学计量比 结合 ,且结合过程是可逆的。荧光热力学和荧光寿命研究表明 ,结合 Tb3+后的 Pvd(即 Pvd-Tb)与 BSA 的结合能力要稍强于结合 Tb3+ 前的 Pvd,两者与 BSA 的结合比都为 1：1；通过对结合 Tb3+ 前后 Pvd 与 BSA 结合常数的计算 ,证明结合 Tb3+ 前后 Pvd 与 BSA 都以疏水作用 力结合。计算得出 Pvd 和 Pvd-Tb 与 BSA 相互作用的一系列热力学常 数 ,表明其与 BSA 之间的反应为放热反应 , 同时是一个自发性的反应。 同样,结合 Tb3+前后的 Pvd 与 HSA 的作用和与 BSA 的相似 ,且 Pvd-Tb 与 HSA 的结合能力稍强于 Pvd。不同的是 Pvd 与 apoOTf 有相互作用 , 但 Pvd-Tb 却完全不与 apoOTf 作用。 Pvd 及 Pvd-Tb 与三种蛋白结合 能力顺序为： BSAHSAapoOTf, 且结合 Tb3+ 前后 Pvd 与三种蛋白结合 能力的顺序为 Pvd-TbPvd。最后 ,动力学实验研究表明 Pvd 能竞争出单 铽 (TbNOTf 和 OTfTbc) 及双铽 (TbNOTfTbc) 伴清蛋白所结合的 Tb3+, 说明 Pvd 与 Tb3+的结合能力远远大于 apoOTf 与 Tb3+ 的结合能力 【关 键词】：荧光铁载体 PvdBSAHSAapoOTf 荧光动力学 【学位授予单位】：山西大学 【学位级别】：硕士 【学位授予年份】：2013 【分类号】：Q93 【目录】：中文摘要 10-11ABSTRACT11-13 第一章综述 13-251.1 引言 131.2铁载体 Siderophore 的发展概况 13-181.2.1铁载体 siderophore 的 分类 14-151.2.2 铁载体 siderophore 的结构 151.2.3 铁载体 siderophore 的功能和作用机理 15-181.3 细菌体内铁吸收、 调控系统 18-221.