Rh(D)血型鉴定SOP整理.pdf

二、Rh （D）血型鉴定操作规程 [ 目的] 保证Rh （D）血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX 医院输血科 [职责] 输血科具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的Rh （D） 血型鉴定（只对该单份标本负责）。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 紧急用血记录 [实验原理] Rh （D）血型是由红细胞表面是否存在或缺失 D 抗原来确定的。D 抗原与细 胞株 BS226 细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。红细胞与抗-D 抗体发生特 异性凝集反应表明该细胞有D 抗原，称为Rh （D）阳性；反之，无特异性凝集现 象表明试验的红细胞缺少正常强度的D 抗原，称为Rh （D）阴性。 [仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、 恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 抗-D 试剂 [标本收集与处理] 无菌操作采集血液标本,采集后的标本尽可能立即进行实验。如果不能立即 实验,应将标本储存于2-8C 冰箱内。收集在ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液标本, 不超过21 天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2 天内进行。 [实验方法与步骤] 1、盐水试管法 ①、正常D 抗原表型检测 Ⅰ、制备受检者2~5%红细胞悬液。 Ⅱ、取一只干净玻璃试管，加1 滴抗D 试剂。 1 第 页 共 3 页 Ⅲ、加入1 滴受检者2~5%红细胞悬液。 Ⅳ、混匀后，1000rpm 离心1 分钟或3400rpm 离心20 秒。 Ⅴ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝 集反应，则判定为Rh （D）阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应混匀 后用低倍镜进行观察。 Ⅵ、若镜下观察有凝集反应，则仍判定为Rh （D）阳性；若镜下观察无凝 集反应，则应继续进行下列操作： Ⅶ、混匀后进行37℃水浴15 分钟。 Ⅷ、1000rpm 离心1 分钟或3400rpm 离心20 秒。 Ⅸ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝 集反应，则仍判定为Rh （D）阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应再 混匀后用低倍镜进行观察。 若镜下观察有凝集反应，则仍判定为 Rh （D）阳性；若镜下观察仍无 凝集反应，则判定为Rh （D）阴性，需要时还应进行弱D 表型检测实验。 ②、弱D 表型抗原检测 Ⅰ、操作步骤与上述盐水试管法检测正常D 抗原表型相同。如果先前已进 行了盐水试管法实验，同一试管可直接用弱D 表型检测实验。 Ⅱ、混匀后，37℃水浴15 分钟。 Ⅲ、用干净的等渗盐水洗涤细胞至少4 次，洗涤后充分将盐水弃掉。 Ⅳ、加2 体积广谱抗人球蛋白于细胞试管中。 Ⅴ、轻轻混匀，500Xg 低速离心15秒。 Ⅵ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝 集反应，则判定为Rh 血型弱D 抗原阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应， 则应混匀后用低倍镜进行观察。 若镜下观察有凝集反应，则仍判定为Rh 血型弱D 抗原阳性；若镜下观 察无凝集反应，则判定为Rh （D）阴性。 2 、玻片法： ①、干净玻片上加1 滴抗D 试剂。 ②、再加入1 滴35-45%的受检者红细胞悬液。 ③、用干净涂棒，将试剂和血液充分混匀。 ④、在一个照亮的观察箱上方轻轻前后倾斜玻片，观察凝集反应。并在显微 镜下镜检证实。 ⑤结果判断：有凝集时，表明所测的红细胞带有D 抗原，判定为Rh （D）阳 性；无凝集时，表明所测的