油菜菌核病接种和观察.docx

PAGE 2 四川农业大学实验（习）报告 班级： 姓名： 日期： 实验四 油菜菌核病的田间调查及接种鉴定 一、实验目的 油菜菌核病[由Sclerotinia sclerotiorun（Lib.）Debary引起]是油菜的主要病害，能分泌一种毒素，其主要成分是草酸，在致病过程中发挥着重要作用。一般情况下可导致油菜减产10 % ~ 20 %；严重情况下可减产80 %，甚至绝收。目前，油菜中还没有发现抗性品种，所以品种经过接种菌核病病菌后，均表现为发病。不同品种的生育期不同，发育进程中遇到的发病条件不同，发病程度也就不同。因此，该病原菌培育抗病品种是防治油菜菌核病既经济、有效，又安全的措施。于是在油菜杂交育种中对菌核病抗性鉴定和抗原的筛选尤为重要，而鉴定方法的选用又是其关键环节。因此，本实验通过调查油菜田间菌核病发病情况，旨在掌握田间菌核病发病症状，同时了解菌核病抗性鉴定的几种方法，通过比较了解各种方法特点。 二、实验内容 1. 油菜菌核病的田间调查实验 选取2个品种（早熟和晚熟），在油菜成熟期，分别调查菌核病田间的自然发病情况，每个品种60株，最后进行相关统计分析。 2. 油菜菌核病的接种鉴定实验 在油菜角果成熟期间，采用牙签接种和菌丝琼脂块接种两种方法。分别对0727AB/2H293R和9799-8AB①/5862R两个油菜品种进行接种，观察接种后的症状并记录病害发生过程，最后分别调查接种后10个植株的发病情况。 三、材料与工具 1. 材料：多个油菜品种的田间群体，用于试验的抗感材料，病原菌为采自试验田甘蓝型油菜残茬上的菌核，接种于土豆培养基（PDA）萌发菌丝后继代两次，4℃保存用于接种。 2. 工具： 纸牌，小刀，铅笔、牙签、薄膜等。 四、方法步骤 （一）油菜菌核病的田间鉴定实验 1. 病害识别 油菜在整个生育期均可发病，结实期发病最重。茎、叶、花、角果均可受害，茎部受害最严重。叶片染病初时，呈不规则水渍状，后形成近圆形至不规则形病斑，病斑中央黄褐色，外围暗青色，周缘浅黄色，病斑上有时轮纹明显，湿度大时长出白色棉毛状菌丝，病叶易穿孔。茎部染病，初现浅褐色水渍状病斑，后发展为具轮纹状的长条斑，边缘褐色，湿度大时表面生棉絮状白色菌丝，偶见黑色菌核，病茎内髓部烂成空腔，内生很多黑色鼠粪状菌核。病茎表皮开裂后，露出麻丝状纤维，茎易折断，致病部以上茎枝萎蔫枯死。角果染病时，初现水渍状褐色病斑，后变灰白色，种子瘪瘦，无光泽。 2. 病害级别和病害指数 各个品种在田间条件下，均可能有一定的发病。病害程度依照周必文等1994年提出的分级标准调查。0级：全株茎、枝、果轴无症状；1级：全株1/3以下分枝数（含果轴，下同）发病或主茎有小型病斑，全株受害角果数（含病害引起的非生理性早熟和不结实，下同）在1/4以下；2级：全株1/3 ~ 2/3分枝数发病，或分枝发病数在1/3以下而主茎中上部有大型病斑，全株受害角果数达1/4 ~ 1/2；3级：全株2/3以上分枝数发病，或分枝发病数在2/3以下而主茎中下部有大型病斑，全株受害角果数达1/2 ~ 3/4；4级：全株绝大部分分枝数发病，或主茎有多个病斑，或主茎中下部有大型绕茎病斑，全株受害角果数达3/4以上。 Σi(每级别i的植株数×病害级别i) 病情指数DI = ×100% 鉴定植株总数×发病最高级别（4） 3. 病害程度调查 选取2个品种（早熟和晚熟），在油菜成熟期，分别调查菌核病田间的自然发病情况，并统计在菌核病田间调查表中。 （二）油菜菌核病的接种鉴定实验 在油菜角果成熟期间，采用牙签接种和菌丝琼脂块接种两种方法。首先观察并记载接种效果和病害发生进程，给出接种后的症状描述和病害发生过程的照片，评述接种效果；然后调查各处理接种株的病害级别；最后统计在菌核病田间调查表（接种）中。其接种具体操作方法如下： 牙签接种法 将牙签均匀摆放于9 cm培养皿中，呈辐射状，然后倒入PDA培养基，接种活化菌丝培养至菌丝长至牙签前部，并用医用镊子在第二片或第三片无柄叶茎秆处打孔后插入带菌牙签。接种后3 d开始，每2 d调查1次主茎病斑长度，共调查3 ~ 4次。 菌丝琼脂块接种法 取菌落边沿8 cm菌丝块接种于第二或三片无柄叶叶腋处，并将菌丝面贴茎秆，菌丝块和茎秆外围以保鲜膜包裹，保持湿度。接种后3 d开始，每2 ~ 3 d调查1次主茎病斑长度，成熟前调查病级。 最终，通过以上各试验操作方法所得数据，比较两个品种、两种接种方式和未接种处理（大田自然发病情况）的病情指数，写出实验报告。 五、实验结果 1. 本试验所选取的2个甘蓝型油菜两系杂交种（0