凝胶成像仪使用方法及注意事项.doc

琼脂糖凝胶成像系统使用说明 主操作界面。 二、打开仓门，将用电泳仪跑好的含Goldview染料的胶块转移到照胶仪的载胶板上，将胶块摆正，然后关紧仓门。 打开电脑菜单中的Image Lab软件，运行程序。 1、程序运行后的界面。可根据自己的实验需求选择不同的选项，在选项左边选框中打上“√”。 2、在应用程序/选择/核酸凝胶/Ethidum Bromide或根据实验要求选择其它种类。确定后进入下一页面。 3、选择滤光片1，确定。（本实验室此仪器只有1个滤光片） 4、利用放大镜调整胶块大小，调好后选择运行实验协议开始照胶。 5、实验协议运行完成后，胶版上显现泳道和条带，利用左边的工具栏中各种工具对图像进行编辑，使图像达到满意的效果。完成后将结果保存在一个文件夹中，以便于以后查阅。 注意事项： 不要戴手套触摸电脑鼠标、键盘、仓门和灯箱电源开关，防止污染； 注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再开软件。 使用过程中禁止开门，防止紫外线外漏。 试验结束后，务必将内部的胶取出，关闭软件。 保持观测室内环境干燥，及时将遗留在观测板上的水或其他液体檫干（可使用软质纸，一般卷纸即可）。 每天晚上请关闭系统电源，并关闭电脑。 DNA琼脂糖电泳方法——后染法（泡胶法） 在锥形瓶中用0.5×TBE 配置琼脂糖溶液（浓度一般为0.8%~2%根据自己需要）。置于微波炉中加热至沸腾，使琼脂糖完全溶解。将锥形瓶取出，摇晃均匀，再将琼脂糖置于微波炉中加热至沸腾，置室温冷却。准备制胶板，插好梳齿。当琼脂糖冷却至70℃左右（手握烧瓶可以耐受），将凝胶倒入制胶板（注意不要产生气泡，若有可用刀片赶置胶末端）。 在室温下静置约30分钟，待凝胶完全凝固后，小心拔去梳齿。 将凝胶放入电泳槽中加入0.5×TBE置液面漫过凝胶表面1-2mm。将样品小心加入电泳凝胶的样品孔中。正确连接电泳仪器电极，以8V/cm的恒定电压电泳25-30分钟。 电泳结束后，关闭电泳仪。取出凝胶，放入200mL加了10μL Goldview的水中染色5min, 于凝胶成像系统中进行观察。 注意事项 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoldenView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。 GoldenView对皮肤、眼睛会有一定的刺激，为安全起见，操作时应该每次带手套，不小心接触皮肤后应该立刻清洗，并妥善处理废弃物。 加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中，不可刺穿凝胶，也要防止将样品溢出孔外。 电泳槽中电泳缓冲液与制胶用的电泳缓冲液应相同，电泳缓冲液刚好没过凝胶1-2 mm 为好，电泳缓冲液太多则电流加大，凝胶发热。 电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。TBE缓冲液可使用10次左右。