人源瞬时受体电位M2型通道Nudix水解酶9同源结构域的提取和纯化.PDFVIP

浙江大学学报 （医学版 ） 2019年2月 JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITY （MEDICALSCIENCES） February2019 http：///med DOI:10.3785/j.issn.1008-9292.2019.02.02 蛋白质的结构与功能 蛋白质的结构与功能 ·专题报道 · 人源瞬时受体电位M2型通道Nudix水解酶9 同源结构域的提取和纯化 1 1 2 1 叶培武 ，余夏飞 ，马 骋 ，杨 巍 1.浙江大学医学院生物物理系，浙江杭州310058 2.浙江大学医学院蛋白质平台，浙江杭州310058 ［摘 要］ 目的：摸索人源瞬时受体电位M2型通道（TRPM2）羧基端Nudix水解酶9 （NUDT9）同源结构域（NUDT9-H）的蛋白提取和纯化方法。方法：异丙基硫代半乳 糖苷诱导表达的Rosetta（DE3）大肠埃希菌菌株经超声破碎和离心后，将收集到的上 清液与GST磁珠结合并用还原型谷胱甘肽洗脱以抽提GST-NUDT9-H融合蛋白，浓 缩离心后再经分子排阻色谱层析纯化，最后经凝血酶酶切并与GST磁珠结合即得 NUDT9-H蛋白。结果：含有0.5% 的十二烷基-β-D-麦芽糖苷（DDM）裂解溶液体系和 0.025% 的DDM分子排阻层析色谱溶液体系能够提高GST-NUDT9-H融合蛋白的稳 定性，再按每2mg融合蛋白加入1U凝血酶切割24h，即获得高纯度NUDT9-H蛋白。 结论：NUDT9-H蛋白稳定性较差，提取和纯化体系中需添加DDM以稳定其构象从而 提高目的蛋白的产量和纯度。 ［关键词］ 瞬时受体电位通道；焦磷酸酶类/药理学；重组融合蛋白质类/分离和提 纯；谷胱甘肽转移酶 ［中图分类号］ Q71 ［文献标志码］ A ExtractionandpurificationofNUDT9 homologydomainof humantransientreceptorpotentialmelastatin2channel 1 1 2 1 YEPeiwu,YUXiafei, MACheng,YANGWei （1.DepartmentofBiophysics, Zhejiang UniversitySchoolofMedicine, Hangzhou 310058, China; 2.ProteinFacility, Zhejiang UniversitySchoolofMedicine,Hangzhou310058,China） Correspondingauthor: YANGWei, E-mail: yangwei@, /0000- 0003-3065-1843 ［Abstract］ Objective：To develop methods of extraction and purification of C- terminalNUDT9 homologydomainofhumantransientreceptorpotentialmelastatin 2 收稿日期：2018-09-30 接受日期：2018-11-12 基金项目：国家自然科学基金；浙江省自然科学基金杰出青年科学基金项目（LR16H090001） 第一作者：叶培武（1995—），男，硕士研究生，主要从事蛋白质纯化及线虫神经元研究；E-mail：yegucheng@；https:// /0000-0002-9177-4022 通信作者：杨 巍（1976—），男，博士，教授，博士生导师，主要从事离子通道研究；E-mail：yangwei@；https://orcid. org/0000-0003-3065-1843 ·6 · 浙江大学学报（医学版）JournalofZhejiangUniversity （MedicalSciences） (TRPM2) channel. Methods：Aftersonicationandcentrifugeof Escherichia