临床核医学体外放射分析.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 三、测定方法 放免测定一般包括五个步骤: 加样、 温育、 分离B与F、 测量 数据处理 质量控制 QC Quality Control: 放射免疫分析是高灵敏度、高特异性的超微量分析方法，需进行严格的质量控制。 (一)实验室内质量控制 Internal Quality Control?:?? 是一个实验室内部实验方法的质量控制，以便在一个人的同一批或不同批实验中，不同操作者和不同方法之间有可比性。 1．标准曲线的质控 （1）最高结合率 即零标准管结合率（B0%），指不加非标记抗原时，标记抗原与抗体的结合率，一般要求在30%～50%，该指标主要用来反映标记物与抗体的质量。 （2）非特异性结合率 非特异性结合率（NSB%）指不加抗体时标记抗原与非特异物质的结合率，一般要求＜5%～10%。 1．标准曲线的质控 （3）最低浓度管和最高浓度管结合率之差: 要求大于30% （4）标准曲线直线回归的参数: 包括截距a、斜率b和相关系数r，要求a、b值稳定，r ＞ 0.99 （5）ED25、ED50与 ED75 指标准曲线的结合率在25%、50%和75%时对应的抗原浓度值，它反映标准曲线的稳定性，有助于批间结果的比较。 (6).质控图 Quality Control Profile 根据药盒给出或连续测定10批以上高、中、低三种已知浓度的质控血清所求出的各自均数±标准差（x±s）。 画出均数线与两个标准差的范围，将以后每次实验测定的高、中、低值标在图上，即为质控图. WHO要求 舍弃条件: 在一次实验中，有下列情况之一者，其结果应予舍弃： ① 三种QCS中有一个测定值＞3s； ② 三种QCS中在同一方向上有两种＞2s； ③ 三种均在同一方向上＞1s。 2. 放射免疫分析药盒质量评价1).精密度 (precision) ①变异系数 （CV）= x / s 一批多管或一管多批的CV分别称批内或批间CV，批内CV于5%，批间CV5%～10%。 ②反应误差关系 : 评价RIA整批误差的综合指标，要求RER小0.04 ???????? 双管计数误差之和 RER ＝ 双管计数均值之和 2)准确度(accuracy) 指测定值与已知真实值的符合程度。 用回收率(recovery rate)来表示： 回收率% ＝ 测定值/真实值×100% 一般要求达到90%～110%。 3) 健全性（perfection） 评价被测物与标准品的免疫活性是否相同。 用标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断方法的可靠性。平行性好者可靠性好 4）灵敏度(sensitivity) 指测定方法的最小可检出量，即从生物样品中能够检出某物质的最小浓度。通常以十组标准曲线的零标准管结合率，求得x和s，以x结合率减去2s的结合率的对应浓度即为灵敏度。 5）特异性(specificity) RIA法的特异性主要取决于抗体的特异性，交叉反应越小，特异性越好。 (二)实验室间的质量控制 实验室外质量控制是对各实验室之间测定结果按统一评价方案及方法比较分析，以提高各实验室之间所得结果的可信性和可比性 第二节.免疫放射分析 immunoradiometric assay IRMA 原理: 将过量的标记抗体与抗原结合，分离结合的标记抗体与未结合的多余的标记抗体，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原量呈正相关. Ag＋*Ab? ? Ag-*Ab ＋ *Ab 免疫放射分析特点 1．以标记抗体作为示踪剂 2．反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比RIA快。 3．灵敏度明显高于放射免疫分析，约为放射免疫分析的10～100倍。 4．标准曲线工作范围宽。 5．特异性高。 6．稳定性好。 第三节. 其他体外放射分析法 放射受体分析法 竞争性蛋白结合分析法 放射酶学分析法 放射微生物分析法 第四节. 非放射标记免疫分析 一.时间分辨荧光分析法 TRFIA 原理: 以稀土元素代替放射性核素标记抗原, 抗体, 或生物活性细胞, 免疫反应发生后用特别的荧光测定仪测定最后产物中荧光的强度, 达到定量分析的目的. 分析特点: 灵敏度高, 稳定性高. 二、酶标记的免疫分析法（Enzyme Immunoassay