微生物的实验室好培养_(2014上课).ppt

* 到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关 微生物的类群 原生生物： 原核生物: 真菌: 病毒: 如酵母菌 单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等 无细胞结构 真核细胞 细菌、蓝藻 原核细胞 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 思考：微生物“吃”什么？ 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3-（为硝化细菌提供N源和能源） 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 2.特殊营养： 维生素、碱基等（生长因子） （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 3.pH、氧气的需求： 4.种类： 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 分离 鉴定 工业 生产 化学成分： 物理性质： 天然培养基 合成培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 分析营养构成？ 5. 配制原则 ⑴目的明确： ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值： 有机碳源 异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸 （CO2碳源） 生产 科研 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌 细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 3.功能： 1.定义： 菌落 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 三.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污