马铃薯Y病毒广东分离物HCPro基因克隆和序列分析.docVIP

马铃薯Y病毒广东分离物HCPro基因克隆和序列分析 　　摘要：利用ＲＴ－ＰＣＲ法对广东烟草样品的马铃薯Ｙ病毒（Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ，ＰＶＹ）辅助成分蛋白质（Ｈｅｌｐｅｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＨＣ－Ｐｒｏ）基因进行了克隆，并对其进行了序列分析。测序结果表明广东ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ（命名为ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ）基因（用ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ表示）全长１ ３９５ ｂｐ，编码４６５个氨基酸。与已报道的ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ基因核苷酸序列相比发现，ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ与ＰＶＹ ＮＴＮ株系（ＰＶＹＮＴＮ）（ＡＢ３３１５１７）的ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ基因核苷酸序列相似性最高，达９９．６％。而氨基酸序列比较表明，ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ与ＰＶＹ Ｎ株系（ＰＶＹＮ）（ＡＭ２６８４３５）的ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ氨基酸序列相似性最高，为９９．１％。进一步将ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ的核苷酸和其编码的氨基酸序列与其他报道的同源基因比对构建了系统关系树，结果显示广东烟草样品中ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ与ＰＶＹＮＴＮ ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ亲缘关系最近。 　　关键词：马铃薯Ｙ病毒；广东烟草样品；ＨＣ－Ｐｒｏ基因；克隆；序列分析 　　中图分类号：Ｓ５３２；Ｓ４３２．４＋１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）20－4298-04 　　 　　Cloning and Sequence Analysis of HC-Pro of PVY-GD Isolate 　　 　　ＧＵＯ Ｘｉａｏ－ｊｉａｎ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｏｎｇｋａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０２２５，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｈｅｌｐｅｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＨＣ－Ｐｒｏ） ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ（ＰＶＹ） ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ． Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＨＣ－Ｐｒｏ ｏｆ ＰＶＹ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ（ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ） ｗａｓ １ ３９５ ｂｐ， ｅｎｃｏｄｉｎｇ ４６５ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ ｓｈａｒｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｓｔｒａｉｎ ＮＴＮ （ＡＢ３３１５１７） （９９．６％）， ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｓｔｒａｉｎ Ｎ （ＡＭ２６８４３５） （９９．１％）． Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ ａｎｄ １７ ｏｔｈｅｒ ＰＶＹ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ ｈａｄ ｔｈｅ ｃｌｏｓｅｓｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｓｔｒａｉｎ ＮＴＮ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ； tobacco leaves in Guangdong； ＨＣ－Ｐｒｏ ｇｅｎｅ； ｃｌｏｎｅ； ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 　　 　　马铃薯Ｙ病毒（Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ，ＰＶＹ）是植物病毒最大属马铃薯Ｙ病毒属（Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ）的典型成员。Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ成员还与其他病毒间有协生作用，它通常作为激发病毒促进另一种异源病毒的复制，而其复制水平不变或稍有降低，如ＰＶＹ就和马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）之间存在协生作用，研究发现ＰＶＹ促进ＰＶＸ的侵染，使ＰＶＸ的危害加重，而ＰＶＸ对ＰＶＹ则无影响，即ＰＶＹ介导ＰＶＹ／ＰＶＸ的协生作用［１－４］，病毒间的协生作用加剧了农作物病毒病的危害，造成了巨大的经济损失。目前ＰＶＹ在全球范围内已成为马铃薯、烟草和辣椒等茄科作物病毒病的主要病源之一，并且在中国范围内烟草遭受ＰＶＹ危害呈逐年上升趋势。 　　根据ＰＶＹ的鉴别寄主反应、血清学反应和引起的症状类型将其分为多个株系，常见马铃薯Ｙ病毒Ｏ株系（ＰＶＹＯ）、马铃薯Ｙ病毒Ｎ株系（ＰＶＹＮ）和马铃薯Ｙ病毒Ｃ株系（ＰＶＹＣ）三种株系。另外又有两种株系，如马铃薯