动物组织DNA的提取与鉴定.pptx

动物组织DNA的提取与鉴定;一、实验目的;二、实验原理;三、实验仪器及试剂;2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液： Tris (pH8.0) 100 mmol/L EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L NaCL 20 mmol/L SDS 10% 胰RNA酶 20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，20℃备用。（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。（4）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1） （5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。盐酸，醋酸钠，琼脂糖，溴酚蓝，溴化乙锭。;*主要的试剂及配置：;*各种试剂的作用;SDS（十二烷基硫酸钠）;苯酚：蛋白质强变性剂;冰无水乙醇;四、实验步骤; 3.加等量的酚：氯仿：异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。 4.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min5. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。 5.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。 ; 6.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。 7.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。 8.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或20℃保存备用。 9.将提取物置于紫外分光光度计上检测其纯度。   ;*鉴定：;5、加样???将DNA样品与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。 6、电泳???安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。 7、染色和观察???取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作时要小心，必须戴手套。;五、注意事项;谢谢观赏！