金黄色葡萄球菌血清8型荚膜多糖的提取纯化及其偶联物免疫学特性的分析-预防兽医学专业论文.docx

目录1引言11.1奶牛乳腺炎的分类11.2金黄色葡萄球菌的研究11.3金黄色葡萄球菌CP研究进展21.4金黄色葡萄球菌的黏附素41.5金黄色葡萄球菌CP的提取和纯化51.6金黄色葡萄球菌CP偶联物的制备71.7结论与展望92金黄色葡萄球菌血清8型CP的提取和纯化102.1金黄色葡萄球菌培养条件的优化102.1.1实验材料102.1.2实验方法112.1.3结果与分析112.1.4讨论122.1.5结论122.2金黄色葡萄球菌血清8型荚膜多糖的粗提132.2.1实验材料132.2.2实验方法132.2.3结果与分析142.2.4讨论142.2.5结论152.3荚膜多糖粗提物含糖量测定152.3.1实验材料152.3.2实验方法152.3.3结果与分析162.3.4讨论172.3.5结论172.4金黄色葡萄球菌血清8型荚CP的纯化182.4.1实验材料182.4.2实验方法182.4.3结果与分析202.4.4讨论212.4.5结论213融合蛋白的诱导表达213.1实验材料213.2实验方法223.3结果与分析243.4讨论253.5结论264血清8型荚膜多糖偶联物的制备及免疫学特性的研究264.1实验材料264.2实验方法284.3结果与分析294.4讨论324.5结论325总体讨论326总体结论32致谢32参考文献32作者简介321． 图1金黄色葡萄球菌革兰氏染色22． 图2金黄色葡萄球菌溶血现象23． 图3金黄色葡萄球菌荚膜多糖34． 图4哥伦比亚固体培养基培养的金黄色葡萄球菌125． 图5葡萄糖浓度与吸光度值标准曲线186.图6重组质粒pET-FnBPB-CLFA表达产物可溶性分析 277.图7目的蛋白的纯化288． 图8紫外可见光扫描多糖-ClfA-FnBPB的偶联物 339． 表1培养基和化学试剂1110．表2酶和试剂1411．表3实验仪器和耗材1412．表4实验仪器和设备2013．表5核酸蛋白浓度2214．表6实验动物免疫分组3115．表7CP8与ClfA-FnBPB的分子结合比 3316．表8间接ELISA检测血清抗体效价 3417．表9CP8偶联物对小鼠的攻毒保护作用 34AMPAmpicillin氨苄青霉素CPCapsular polysaccharide荚膜多糖CP8Type 8 capsularpolysaccharides荚膜多糖血清ClfAClumping factorA凝集因子AEDTAEthyIenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸8型ELISA FnBPBIgGIPTGEnzyme linked immunosorbentassay Fibronectin-bindingproteins B ImmunoglobulinGIsopropylβ-D-1Thiogalactopyranoside酶联免疫吸附测定 纤黏连结合蛋白B 免疫球蛋白G异丙基O-β-D-硫代半乳KDaKilodalton糖苷千道尔顿ODOptical density吸光度PBSPhosphate-bufferedsaline盐酸缓冲液生理盐水r/minRounds perminute每分钟转数S.aureusStaphylococcus aureus金黄色葡萄球菌SDSSodium dodecyl sulfate十二烷基磺酸钠TEMEDTetramethylethylenedamine四甲基乙二胺TrisTris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷1引言内蒙古农业大学硕士学位论文1奶牛乳腺炎又称乳房炎，是奶牛乳房受到不同因素的刺激后造成乳腺组织产生炎 症的一种疾病。奶牛乳房炎这类疾病给奶牛业带来的经济损失最为严重，并且广泛分 布在世界各地。奶牛乳腺炎不仅对奶牛的乳腺组织造成损伤，还影响产奶量和牛奶的 品质[1]，而且制约乳品加工业的发展，甚至危害人类健康[2]。乳房炎分为临床型和隐性形两大类，据资料显示，全球约1/3的奶牛患有各种类 型的乳腺炎[3]，因此造成的经济损失非常严重，每年高达350多亿美元[4]。我国奶牛 临床型乳房炎的发病率大约为15～20%，而隐性乳房炎的发病率则高达50～70%[5]。 奶牛乳腺炎主要是由于多种病原微生物侵染奶牛乳腺而造成的一种疾病[6]。其中 金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）是奶牛乳房炎的主要致病菌之一[7]， 也是引起人类外伤感染的主要病原菌；而且奶牛乳腺组织如果被金黄色葡萄球菌感 染，一般很难治愈。大量研究证实，金黄色葡萄球菌的主要毒力因子包括荚膜多糖（Capsularpolysaccharide,CP）、黏附素（adhesins）、毒素（toxin）和酶等，且黏附 素和荚膜多糖是在金黄色