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第30卷第

第30卷第6期2024年3月

Vol.30，No.6Mar.，2024

ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulae

大承气汤通过内源性抗菌肽mCRAMP对脓毒症小鼠肠屏障的保护作用及机制

李袁袁1，2，钟旋3，刘磊4，孙淑亚1，凌家俊1*，林荣锋1，2*

（1.广州中医药大学中药学院，广州510006；

2.东莞广州中医药大学研究院，广东东莞523808；3.广东省妇幼保健院，广州511442；

4.广州中医药大学第四临床医学院，深圳市中医院，广东深圳518033）

［摘要］目的：采用分子对接和体内动物实验探讨大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障的保护作用及分子机制。方法：采用文本挖掘方法筛选大承气汤的活性成分，利用AutoDockTools和DiscoveryStudio分子对接软件研究其关键活性成分与脓毒症主要作用靶点紧密连接蛋白-1（Claudin-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α)、白细胞介素-6（IL-6）、抗菌肽（mCRAMP）、Toll样受体4（TLR4）和髓样分化因子88（MyD88）的相互作用。动物实验采用C57BL/6小鼠50只，每组10只，随机分成5组，分别为假手术组、模型组、大承气汤低、高剂量（4、8g?kg-1）组和乌司他丁（50000U?kg-1）组。造模前、手术当天和术后，各组给予相应的药物进行干预。除假手术组外，其余各组小鼠均采用盲肠结扎穿刺法（CLP）制备脓毒症模型。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清D-乳酸水平，评估肠黏膜通透性；采用苏木素-伊红（HE）染色法观察回肠组织病理变化，评估肠黏膜损伤程度及炎症浸润；采用蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测小鼠回肠组织Claudin-1和Occludin蛋白表达水平，评估肠机械屏障功能；采用ELISA检测小鼠回肠组织TNF-α和IL-6水平，评估肠道炎症水平；采用免疫组化法（IHC）观察回肠组织mCRAMP蛋白表达；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-timePCR）检测小鼠回肠组织内mCRAMP、TLR4和MyD88的基因表达水平，探讨大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障的保护机制。结果：分子对接结果表明，采用文本挖掘方法所筛选出的10个大承气汤活性成分中多数与脓毒症靶点具有结合活性，主要通过范德华力、氢键和其他共轭体系相连。动物实验结果表明，与模型组比较，大承气汤低、高剂量组小鼠血清D-乳酸水平显著降低（P<0.01）；回肠组织损伤、黏膜水肿减少，小肠绒毛完整性较好，炎症细胞浸润减少；回肠组织Claudin-1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）；回肠组织IL-6水平显著降低（P<0.01）；回肠组织mCRAMP蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）；回肠组织TLR4和MyD88mRNA表达水平显著降低（P<0.01）；大承气汤高剂量组小鼠回肠组织TNF-α水平显著降低（P<0.01）和Occludin蛋白表达水平显著升高（P<0.01），大承气汤低剂量组小鼠回肠组织Occludin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障具有保护作用，其可减轻肠组织炎症水平，修复肠黏膜损伤，提高肠紧密连接蛋白水平，降低肠黏膜通透性，作用机制可能与内源性抗菌肽mCRAMP蛋白和基因表达的增加及其下游TLR4/MyD88炎症通路基因的下调有关。

［关键词］大承气汤；脓毒症；肠屏障；抗菌肽；Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）

［中图分类号］R284；R285；R289；R287；R22；R2-031；R33；R24［文献标识码］A［文章编号］1005-9903（2024）06-0020-09

［doi］10.13422/ki.syfjx［增强出版附件］内容详见http：//或http：//［网络出版地址］https:///urlid/11.3495.R1602.012

［网络出版日期］202