高考生物复习第十一单元现代生物科技专题11.1基因工程全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特等奖PPT.pptxVIP

考点研析;;第1讲基因工程;考纲要求;考点1基因工程操作工具

1．限制酶

(1)存在：____________中。

(2)作用：__________________________________，并使每一条链中特定部位两个核苷酸之间________________断开。

答案：1.(1)原核生物(2)识别双链DNA分子某种特定核苷酸序列磷酸二酯键;答案：(3)黏性末端平末端

;2．DNA连接酶

(1)作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开两个核苷酸之间磷酸二酯键。

(2)种类;3.载体

(1)条件：能在受体细胞中复制并稳定保留；含有一至多个限制酶切点；含有标识基因。;注意：(1)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。

(2)限制酶含有特异性，即一个限制酶只能识别特定碱基序列，并在特定位点上进行切割；限制酶不切割本身DNA原因是原核生物中不存在该酶识别序列或识别序列已经被修饰。

(3)限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等相关酶分析比较;DNA聚合酶;[题组精练]

1．图1表示含有目标基因DDNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一个质粒结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答以下问题。;第12页;(1)图1一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由__________连接。

(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生末端是________末端，其产物长度为____________。

(3)若图1中虚线方框内碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________种不一样长度DNA片段。;(4)若将图2中质粒和目标基因D经过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选取限制酶是____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒大肠杆菌，普通需要用添加________________培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒大肠杆菌菌株中目标基因D不能正确表示，其最可能原因是______________。;解析：(1)题干中强调“一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基”，可经过画出DNA结构示意图处理。(2)SmaⅠ识别并切割序列为CCC↓GGG，所以产生末端为平末端，经SmaⅠ切割后，DNA片段会形成三个小DNA片段，按切割位点算分别是：534＋3＝537(bp)；796－3－3＝790(bp)；658＋3＝661(bp)。(3)用SmaⅠ切割基因D，会形成537bp、790bp、661bp三种类型。题图1中虚线方框内C—G被T—A替换，失去了一个酶切位点，则会被切割成534＋796－3＝1327(bp)和658＋3＝661(bp)两种类型。所以一共会得到537bp、790bp、;1327bp、661bp4种类型片段。(4)依据基因D和质粒核苷酸序列可知，可选取BamHⅠ和MboⅠ进行切割，但MboⅠ会破坏掉两种抗生素抗性基因，所以只能用BamHⅠ进行切割。

答案：(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖

(2)平537bp、790bp、661bp

(3)4

(4)BamHⅠ抗生素B同种限制酶切割形成末端相同，部分目标基因D与质粒反向连接;2．下表是几个限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶酶切位点，其中切割位点相同酶不重复标注。请回答以下问题：;第18页;(1)用图中质粒和目标基因构建重组质粒，应选取________两种限制酶切割，酶切后载体和目标基因片段，经过________酶作用后取得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于________态大肠杆菌。

(2)为了筛选出转入了重组质粒大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________，平板上长出菌落，惯用PCR判定，所用引物组成为图2中________。

(3)若BamHⅠ酶切DNA末端与BclⅠ酶切DNA末端连接，连接部位6个碱基对序列为________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”、“都不能”或“只有一个能”)切开。;(4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能取得________种大小不一样DNA片段。

解析：(1)选择限制酶应在目标基因两端且在质粒中存在识别位点，故能够用来切割限制酶为BclⅠ、HindⅢ、BamHⅠ和Sau3AⅠ，但因为BamHⅠ和Sau3AⅠ可能使质粒中开启子丢失或破坏抗性基因，所以应选取BclⅠ、HindⅢ两种限制酶切割。酶切后载体和目标基因片段，经过DNA