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第31页,共48页,2024年2月25日,星期天10.更换样品利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位环”,照明器上的“倾斜装置”,“聚光器再聚焦指紧螺钉,可容易更换样品。第32页,共48页,2024年2月25日,星期天11.显微镜操作结束后1)关闭电源开关(开关拨至O)2)灯室冷却后,把显微镜上的聚乙烯防尘罩盖好。第33页,共48页,2024年2月25日,星期天相差(PH)显微术观察透明细胞或其他透明样品,需配相衬聚光器、相衬物镜、相衬环等附件。相衬板将衍射光推迟1/4波长,振幅相减,样品暗,背景亮,称正反差或暗反差,分正低(DL)、正低低(DLL)和中型暗相差(DM)。折光率较强的样品用后者。相衬板将直射光推迟1/4波长,振幅相加,样品亮,背景暗,称负反差或明反差,分负中(NM)和负高(NH)。折光率较小的样品用后者。第34页,共48页,2024年2月25日,星期天关键点:将有ph标记的物镜与物镜相同ph标记的聚光器模块一起送入光路,在进行显微术前,校正(对中)物镜里的相差板及聚光器模块里的环形光阑。第35页,共48页,2024年2月25日,星期天1.用明视场(BF)显微术对样品聚焦。
2.相差观察时对显微镜的调整。1)将ph物镜转入光路。2)转动“聚光器转盘”,使其与在光路中的物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph标记。3)向右转动聚光器上的“孔径光阑调节杆”,完全打开孔径光阑。第36页,共48页,2024年2月25日,星期天第37页,共48页,2024年2月25日,星期天3.对中环形光阑1)把“目镜筒转盘”设到<B>位置,转动勃氏镜聚焦螺钉,使环形光阑像清晰。2)用六角起子转动聚光器模块中的两个“环形光阑对中螺钉”,使环形光阑像与物镜中的相差板环形像同心。3)把目镜筒转盘位置再转到<O>上。调中心手轮第38页,共48页,2024年2月25日,星期天第39页,共48页,2024年2月25日,星期天4.进行观察1)把聚光器“孔径光阑”完全打开。2)移动透射照明器上的“视场光阑调节杆”,使视场光阑像大小与视场大小接近。3)把透射照明器上的“NCB11滤色片”从光路中移开,把“GIF滤色片”移进光路。(提高反差)4)可通过把“ND滤色片”移进或移出光路来调节视场亮度。第40页,共48页,2024年2月25日,星期天第41页,共48页,2024年2月25日,星期天5.使用不同放大倍数的物镜进行观察1)把所需放大倍数的相差物镜移入光路。2)转动“聚光器转盘”,使其与在光路上物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph标记。3)调节放入光路中的环形光阑中心。(见程序3)第42页,共48页,2024年2月25日,星期天6.更换样品利用使用显微镜主机上的“物镜再聚焦定位环”,透射照明器上的“倾斜”装置及“聚光器再聚焦指紧螺钉”,可容易更换样品。7.显微镜操作结束后与明视场显微术步骤相同。第43页,共48页,2024年2月25日,星期天微分干涉(DIC)显微术可观察到样品的立体感,适用于显微操纵等,彩色图像。因塑料培养皿的不均衡张力在DIC下呈现干涉条纹、DIC不宜用于普遍使用的塑料培养皿。DIC的光通亮大,可用到100倍物镜。需配DIC聚光器等附件,使用明场物镜。1.用明场找到视野2.压入起偏器,选择相应模块3.调节孔径光栅至最佳效果。第44页,共48页,2024年2月25日,星期天荧光(E)显微术适用于本身属于或被染色后形成荧光体的样品。荧光体在一定波长光(紫外或可见)的激发下发光(即荧光,波长长于激发光)。需配荧光附件和滤光器等。前者主件为激发光源,一般分汞灯系统和卤灯系统,汞灯既适用于紫外光激发也适用于可见光激发,且能量较高;后者只适用于可见光激发。(此处插入拍摄图片)第45页,共48页,2024年2月25日,星期天1.操作之前要求:(1)检查荧光装置的工作时间,如荧光灯的工作时间超过使用寿命,应予以更换。(2)使用物荧光载波片(3)每次使用之间必须间隔20分钟。第46页,共48页,2024年2月25日,星期天2.用明场找到视野。3.关闭明场光源,打开荧光电源预热5分钟。4.开启荧光盘,并根据要求选择荧光通道。5.激发荧光发生器,打开光闸,即可进行观察。第47页,共48页,2024年2月25日,星期天感谢大家观看第48页,共48页,2024年2月25日,星期天关于特殊显微镜结构及操作技术【实验用品】1.试剂:10μg/mL罗丹明123的磷酸缓冲液(PBS)荧光染料。2.器材:倒置显微镜,相差显微镜附件(相差物镜、转盘聚光器、
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