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最新二代测序技术在血液肿瘤中的应用中国专家共识

血液肿瘤是一类具有高度异质性的疾病，其诊疗需要结合形态学、免

疫学、遗传学和分子生物学进行综合分析。二代测序(Next-generation

sequencing,NGS)作为新的分子生物学技术，具有通量高、灵敏度高、成本低等优势，是探索血液肿瘤的分子发病机制并指导临床诊疗的重要手段。为推动NGS在血液肿瘤诊疗中的应用，提高诊疗水平，中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会、中华医学会血液学分会、中华医学会病理学分会组织国内相关的血液、病理和检验专家，结合国外权威资料和已积累的大样本数据，制订了NGS在血液肿瘤中应用的中国专家

共识。

血液肿瘤中常见的分子生物学异常主要包括基因突变、融合基因及基因异常表达。目前NGS在基因突变的检测方面应用最为广泛和成熟，

本共识仅涉及基因突变的检测。

NGS在血液肿瘤诊疗中的应用价值

1.诊断分型：

基因突变的检测在急性髓系白血病(AML)伴重现性遗传学异常、遗传易感性髓系肿瘤、骨髓增殖性肿瘤(MPN)、骨髓增生异常综合征伴环

形铁粒幼红细胞(MDS-RS)、毛细胞白血病(HCL)和淋巴浆细胞淋巴

瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM)的诊断中具有关键性的作用，对于其

他血液肿瘤则起到辅助诊断的作用。

2.预后判定：

基因突变是各类血液肿瘤预后判断的重要依据，目前NCCN指南已提出了基于基因突变的AML预后分层体系。此外，MDS、MPN、MDS/MPN、急

性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤

(CLL/SLL)、LPL/WM、大颗粒淋巴细胞白血病(LGLL)中，已经证实了一些具有明确预后意义的突变基因。其他血液肿瘤中突变基因的预

后意义尚有待于进一步研究。

3.指导治疗：

一方面，基因突变检测可提供分子治疗靶点，对应靶向药物进行治疗，目前已有基于突变基因的靶向药物应用于临床或处于临床试验阶段，其中FLT3、IDH1/2、BRAF及JAK-STAT信号通路相关的突变基因已有靶向药物上市；另一方面，基因突变可以导致对某些药物的敏感或者耐受，及时检测有助于治疗方案的调整。例如，TP53突变的CLL/SLL患者对常规化疗反应差，MYD88和CXCR4基因突变可影响伊布替尼在LPL/WM中的治疗效果，ABL1激酶区突变是慢性髓性白血病(CML)和

Ph+ALL酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐受的主要机制之一。

4.微小残留病(MRD)监测：

基因突变是MRD监测的分子标志物之一。虽然实时定量PCR方法和流式细胞学是目前主流的MRD监测方法，但是由于NGS灵敏度随测序深

度加深可进一步提高，在MRD监测方面具有更大的优势。

5.克隆演变：

血液肿瘤在发展过程中会伴随动态的克隆演变，或是基因突变负荷的改变，或是新的突变基因的出现，及时监测基因改变，有助于了解疾

病进展并调整治疗方案。

基本流程

(一)检测的基因种类列表设计

1.检测的基因：

血液肿瘤相关检测基因由临床血液肿瘤专家和实验室专家共同制定，主要依据中国抗癌协会、中华医学会、WHO、NCCN等机构发布的血液系统疾病诊疗指南或者专家共识。对于其他权威文献报道的重要基因，可在验证之后纳入基因列表。血液肿瘤易感的胚系突变基因，根据检测需求可以纳入，例如CEBPA、DDX41、RUNX1、ETV6、GATA2等基因除了可发生体细胞突变外，发生胚系突变可导致髓系肿瘤的易感。检测基因的数量应在满足临床需求的基础上，综合疾病类型、实验技术、样本数量以及检测成本达到最优化的设计。随着基础及临床研究的不

断深入，检测的基因种类亦需随之更新。

2.检测区域：

被检测的基因所覆盖区域可参考临床诊疗指南、权威数据库、文献及实验室自建数据库等。首先应纳入基因热点突变区域或重要结构域的编码区域，例如NPM1基因c.860_863为热点突变区域，NOTCH1基因突变最多见于HD结构域及△PEST结构域；无明确热点突变区域或突变位点分布比较分散的基因，应检测全部外显子，例如TP53、RUNX1等；剪接位点突变有可能导致外显子跳跃，影响蛋白功能，建议根据数据库记录和文献报道将剪接位点±5bp的区域纳入检测范围；对于存在非翻译区(UTR)突变的基因，例如BCL6,则应纳入相应区域检测。需要注意的是，对于不能覆盖的热点突变类型或重要区域可通过其他检

测方法进行补充，并在检测报告中明确说明。

(二)实验流程

1.样本采集：

疑诊为血液肿瘤的患者，初诊时应留存新鲜骨髓、外周