猪塞尼卡谷病毒的检测　重组酶恒温扩增法.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 41 37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4674—2023 猪塞尼卡谷病毒的检测 重组酶恒温扩增 法 2023-11-14发布 2023-12-14实施 山东省市场监督管理局  发 布 DB37/T 4674—2023 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本文件由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 I DB37/T 4674—2023 猪塞尼卡谷病毒的检测 重组酶恒温扩增法 1 范围 本文件描述了猪塞尼卡谷病毒 （Seneca Valley virus, SVV）的重组酶恒温核酸扩增检测 （Recombinase Polymerase Amplification）方法。 本文件适用于猪塞尼卡谷病毒的快速检测、诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。所用液体试剂均需使用无DNA/RNase的容器进行分装。 RNA提取试剂盒：市售。 重组酶恒温扩增试剂盒：市售。 水：GB/T 6682，一级。 PBS溶液：pH值7.4。 称取磷酸二氢钾(KHPO)0.27 g、磷酸氢二钠(NaHPO)1.42 g、氯化钠(NaCl)8 g、氯化钾(KCl)0.2g， 2 4 2 4 加灭菌水约800 mL充分搅拌溶解，加入浓盐酸调pH值至7.4，定容至1 000 mL。 0.1% DEPC水。 1 000 mL水中加1 mL DEPC，放在1 000 mL容量瓶中静置4 h后备用。 重组酶恒温扩增检测引物：按附录A规定。 阳性、阴性对照。 ——阳性对照：带有SVV序列DNA全长的质粒。 ——阴性对照：已知SVV 阴性样本的DNA。 5 仪器设备 荧光定量PCR仪：配有配套反应管 （板）。支持多通道检测。 分析天平：精度为1 mg。 1 DB37/T 4674—2023 高速冷冻离心机：转速不低于13 000 g/min。 冰箱：2  ℃～8  ℃和-20