肿瘤细胞的培养.pptVIP

肿瘤细胞的培养Cultivation of tumor cells 裸鼠是来自小鼠的一种变异品种，无毛，缺乏胸腺，有先天性免疫缺陷，接种肿瘤细胞后易生长成瘤，但对外界环境有害因素的抵抗力也差，易于感染，并惧严寒和高温，难以饲养和繁殖。裸鼠虽无胸腺，体内仍有NK杀伤细胞，对外仍有一定抵抗力，只要饲养环境基本无菌即可维持动物正常生存。 裸鼠培养 （1）瘤块接种：取新鲜瘤组织，用Hanks液洗 净血污，切成1～3毫米3小块，用穿刺针头 吸一小瘤块，用酒精棉球擦拭动物腹部后， 直接刺入皮下，注入瘤块；（2）饲养观察，待肿瘤生长达较大体积后，剥 取出瘤组织；（3）进行体外培养。（4）为防止失败，仍取部分瘤组织继续在裸鼠 体内传代。通过裸鼠媒介接种，有活力的 肿瘤细胞数量增多，细胞培养易于成功。 三、体外培养肿瘤细胞生物学检测 2、形态观察： 3、细胞生长特点： 4、细胞核型分析： 1、组织起源: 5、软琼脂培养：检测集落形成能力。 6、动物致瘤试验：检测成瘤能力。 7、其他：同位素标记、组织化学成分分析、 荧光显微镜观察等。 应说明培养材料起源于哪个胚层、器官组织、什么样供体、何种疾病等，必要时要提供病理诊断鉴定资料。 组织起源 形态观察 （1）一般形态观察：可做活细胞相差显微镜观察并摄影。主要观察细胞形状、大小、核浆比例、染色质和核仁大小、及多少等。 （2）超微结构观察：超微结构观察有助于比较确切地说明细胞的性质和特点，如注意微绒毛的形态、多少，桥粒的有无，微丝微管的多少和排列状态等。 细胞生长特点 （1）细胞生长曲线 是测定细胞绝对增长数值最简易的方法，是把逐日检查的数值绘成图即为细胞生长曲线。 （2）细胞分裂指数 Normal cells grow in monolayer Cancer cells grow in clumps （3）克隆形成率（接种存活率） 克隆形成率：向底物上接种单细胞悬液，贴壁后能形成细胞群或克隆的细胞百分数，也称接种存活率，也表示细胞活力。 克隆形成率＝ 形成克隆数 接种细胞数 × 100 （接种存活率） 细胞接种率：细胞被制成分散的悬液后，接种到底物上能贴壁并能存活生长的细胞百分数值，用以表示细胞群的活力。细胞接种率与细胞活力成正比。 细胞接种率＝ 接种细胞数 ×100 贴壁存活细胞数 细胞接种密度和克隆形成率有一定关系 做接种率测定时，一般在接种后一周进行检查，每一细胞群数量达8或10个以上细胞时才能算做一个克隆，用解剖镜检查甚好。 细胞克隆形成 ※ （4）细胞周期时间测定 应用同位素标记自显影法。用支持物细胞培养法在细胞进入增生期时用（3H）胸腺嘧啶核苷标记30分钟后，每间隔30分钟取材处理，至48小时止。主要观察和计算细胞分裂相出现的时间，高峰和消失分裂相数，绘制成图进行分析。通过同位素自显影测定细胞周期同时，亦可借以了解DNA合成情况。 癌细胞大多为异倍体，多倍体，并有标记染色体。 体外培养细胞核型常不稳定， 应定期检查。 可作为细胞转化及恶性程度的检查。 4、细胞核型分析 5、软琼脂培养 软琼脂培养，特别是双层软琼脂培养，是当前检测转化细胞和肿瘤细胞最为常用的方法，与细胞恶性程度有很大的符合率。 双 层 软 琼 脂 培 养 用来检测成瘤能力。即向异种动物体内接种细胞悬液，看是否能生长成瘤。受体动物可用小鼠或大鼠。如系一般动物，需做射线照射处理，以压制动物免疫反应，用乳鼠较好。近年多用裸鼠，优点是无需射线照射、比较方便，但裸鼠要求的饲养条件较高。 6、动物致瘤试验 由人肿瘤组织来源居多数。 四、肿瘤细胞系或株 是现有细胞系中最多的一类; 大多由癌细胞建成，呈上皮型细胞; 均已传百代以上; 具有不死性和异体接种致瘤性; 1、特点： HeLa： 为供体患者的姓名 CHO： 中国地鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary） 宫-743： 宫颈癌上皮细胞， 1974年3月建立 NIH3T3： 美国国立卫生研究所（National Institute of Health）建立，每隔3天传代， 接种3X105/毫升。 2、命名：无统一规定。 3、建立细胞系