生活饮用水标准检验方法验证报告.docxVIP

方法验证报告 项目名称： 生活饮用水 总大肠菌群 方法名称： 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 总大肠菌群 多管发酵法 GB/T5750.12-2006  验证单位： 安阳协力环境检测有限公司 通讯地址： 安阳市龙安区嘉洲灏庭北门东楼4F 报告编写人：  、实验室基本情况 表1-1参加验证人员情况登记表 姓名 性别 年龄 职务或职称 所学专业 从事相关分析工作年限 张鑫 男 32 初级工程师 应用化学 8年 关少坤 男 23 化验员 计算机 1年 魏悦 女 23 化验员 社会体育 1 年 注： 参加验证人员需要熟悉仪器结构、 原理，熟练操作仪器， 能独立完成整个分析过程。 表1-2使用仪器情况登记表 仪器名称 仪器厂家、规格型号 仪器编号 性能状（计量／校准状态、量 前处理仪器、设备 压蒸汽灭菌器 上海申安医疗LDZX-50KBS AYXL/YQ-16 已校准 生化培养箱 北京东联哈尔HPS-200 AYXL/YQ-10 已校准 药品冷藏柜 中科美菱YC-395L AYXL/YQ-17 已校准 分析仪器、设备 电子天平 赛多利斯有限公司SQP AYXL/YQ-11 已校准 生物显微镜 宁波永新光学N-125 AYXL/YQ-06 已校准 注：仪器包括采样、前处理、分析过程涉及到的所有仪器。 表 1-3 使用试剂及溶剂登记表 名称 厂家、规格 有效期 开并 标准溶液、质控样、内标、标准参考物质 无 溶剂、试剂 蛋白胨 乳糖 磷酸氢二钾 琼脂 蒸馏水 伊红水溶液 美蓝水溶液 结晶紫  乙醇 草酸铵水溶液 溶剂、试剂 碘 碘化钾 沙黄  二、方法原理及证实内容 l 适用范围 生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定 2 使用仪器设备 生化培养箱 药品冷藏箱 电子天平 生物显微镜 3 试剂配制 3.1乳蛋白胨培养基：称取乳糖蛋白胨干粉培养基23g溶于1000ml 蒸馏水中，家人煮沸至完全溶解，分装有倒立发酵管试管中，每管10ml, 115° C, 20min高压灭菌备用。 3.2双料乳糖蛋白陈培养基：称取乳糖蛋白陈干粉培养基 3.2双料乳糖蛋白陈培养基：称取乳糖蛋白陈干粉培养基46g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装有倒立发酵管试管中 每管10mL,115C,20mi高压灭菌备用. 3.3伊红美蓝培养基：称取伊红美蓝培养基37.5g 溶于1000ml蒸馏 水中， 加热煮沸至完全溶解，121C，15min高压灭菌备用。 3.4无菌生理盐水:称取氯化钠8.5g 溶于1000ml蒸馏水中, 12C,15min高压灭菌备用。 3.5 革兰氏染色液 4 方法步骤及条件 4.1验证用菌株及菌种要求 大肠埃希菌【ATCC 25922】验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代 (从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0代)。 4.2验证样品制备 接种大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养 18~24小 时。用0.85%无菌生理盐水制成每lmL 含菌数为100-1000cfu的菌 悬液, 取 10mL 菌悬液加入到90mL 灭菌水样中,作为检测样品原液。灭菌水样中含菌量为10~100cuf。 4.3 实验操作 4.3.1用lmL 无菌吸管吸取验证样品ImL，延管壁缓缓注入9mL无菌生理盐水中，振摇试管使其混合均匀，制成1：10 的样品菌液。 4.3.2取10mL 水样接种到10mL 双料乳糖蛋白胨培养液中, 取1mL 水样接种到10mL 单料乳糖蛋白胨培养液中，再取lmLl：10的水样 接种到单料乳糖蛋白胨培养液中，每 一稀释度接种5管。 4.3.3取15 支乳糖蛋白胨培养管加入无菌生理盐水各lmL 作为阴性对照管,36°C±1°C培养24±2h小时。 4.4 实验结果判断依据 乳糖蛋白胨培养管未产气产酸，判该管未检出总大肠菌群；若产酸产 气，应取发酵管中的培养物一环分别接种于伊红美蓝琼脂平板上，培 养 18-24h小时，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏 染色、镜检和证实试验。 深紫黑色、具有金属光泽的菌落； 紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落：淡紫红色中心较深的菌落。 经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36C 土 lC培养箱中培养24土2h，有产酸产气者，即报告总大肠菌群阳性。 4.5 总大肠菌群最可能数的报告 根据总大肠菌群阳性管数，检索MPN表，报告每100ml样品中总大肠菌群的MPN值。 4.6 总大肠菌群的记录及报告 样品编号 样品名