20.化妆品中α-熊果苷等4种原料的检验方法.docx

附件20 化妆品中α-熊果苷等4种原料的检验方法 α-Arbutin and other 3 kinds of components in cosmetic 1 范围 本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、面膜类、粉类化妆品中α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚含量的测定。 2 方法提要 样品经甲醇超声提取后，采用高效液相色谱系统分离，荧光检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。如有阳性结果，应用液相色谱-串联质谱法、气相色谱-串联质谱法进行定性确证。 本方法中α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的检出限、定量下限及取样量为1.0 g时检出浓度和最低定量浓度见表1。 表1 α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度 序号 原料名称 检出限 （ng） 定量下限 （ng） 检出浓度 （μg/g） 最低定量浓度 （μg/g） 1 α-熊果苷 1.0 2.5 2.0 5.0 2 熊果苷 1.0 2.5 2.0 5.0 3 氢醌 0.10 0.30 0.20 0.60 4 苯酚 0.10 0.30 0.20 0.60 注：本方法中的熊果苷即指β-熊果苷。 3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 甲醇，色谱纯。 3.2 微孔滤膜（0.45 μm）。 3.3 标准品：α-熊果苷等4种原料的标准品信息详见附录A。 3.4 标准储备溶液：分别称取α-熊果苷等4种原料标准品（3.3）各10 mg（精确至0.00001 g），置于不同10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，配制成浓度均为1 mg/mL的标准储备溶液。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪，荧光检测器。 4.2 天平。 4.3 离心机，转速不低于14000 r/min。 4.4 超声波清洗器。 4.5 涡旋振荡器。 5 分析步骤 5.1 混合标准溶液的制备 分别准确量取α-熊果苷标准储备溶液（3.4）1 mL、熊果苷标准储备溶液（3.4）1 mL、氢醌标准储备溶液（3.4）0.1 mL和苯酚标准储备溶液（3.4）0.2 mL，置同一个10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1）定容至刻度，配制成α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚浓度分别为100、100、10、20 μg/mL的混合标准溶液。 5.2 混合标准系列溶液的制备 准确量取不同体积的混合标准溶液（5.1），用甲醇（3.1）配制成浓度如表2所示的混合标准系列溶液。 表2 标准储备溶液浓度及混合标准系列溶液浓度 序号 原料名称 标准储备溶液浓度 （μg/mL） 混合标准溶液浓度 （μg/mL） 混合标准系列溶液浓度 （μg/mL） 1 α-熊果苷 1000 100 0.25 0.5 1 2 8 20 2 熊果苷 1000 100 0.25 0.5 1 2 8 20 3 氢醌 1000 10 0.025 0.05 0.1 0.2 0.8 2 4 苯酚 1000 20 0.05 0.1 0.2 0.4 1.6 4 5.3 样品处理 称取样品1.0 g（精确至0.001 g），置10 mL具塞比色管中，加入甲醇（3.1）至刻度，涡旋振荡30 s，使样品与提取溶剂充分混匀。密塞，超声提取20 min，放置至室温，取适量样品溶液离心（转速14000 r/min）5 min，取上清液经微孔滤膜（0.45 μm）（3.2）过滤，取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇（3.1）稀释。 5.4 参考色谱条件 色谱柱：C18柱（4.6 mm×250mm，5 μm），或等效色谱柱； 流动相：A：水，B：甲醇（3.1）；梯度洗脱程序详见表3； 柱温：20 ℃； 流速：0.5 mL/min； 进样量：5 μL； 检测波长详见表4。 表3 流动相梯度洗脱程序 时间/min V（A）/% V（B）/% 0.0 95 5 21.0 95 5 22.0 55 45 43.0 50 50 48.0 50 50 48.1 0 100 50.0 0 100 50.1 95 5 60.0 95 5 表4 α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的检测波长 序号 原料名称 激发波长（nm） 发射波长（nm） 1 α-熊果苷 292 337 2 熊果苷 292 337 3 氢醌 298 345 4 苯酚 280 318 5.5 测定 在“5.4”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.2）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.3”项下的待测溶液进样，根据保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲