微波法提取苹果皮类黄酮及其抗氧化性研究.docx

? ? 微波法提取苹果皮类黄酮及其抗氧化性研究*1 ? ? 黄　庆，张河辉，吴笑臣，张熊禄 (赣南师范学院 化学化工学院，江西 赣州　341000) ? 微波法提取苹果皮类黄酮及其抗氧化性研究* 1 黄庆，张河辉，吴笑臣，张熊禄? (赣南师范学院 化学化工学院，江西 赣州341000) Summary：以苹果皮为原料，采用微波法及单因素试验，黄酮类化合物提取率为考察指标，优选其最佳提取工艺；并以Trolox作为参照，对提取化合物进行抗氧化性实验研究.结果表明：最佳提取工艺条件是溶剂60%乙醇，料液比1∶5(g/mL)，微波功率390 w，提取时间2 min，黄酮类化合物的提取率可达2.50%.且苹果皮渣黄酮类化合物对GO·的清除率随其浓度的增大而增大，最大清除率达到25.2%，说明目标物质对机体内自由基有较好的清除能力. Key：黄酮类；苹果皮；微波；Galvinoxyl自由基；Trolox；抗氧化 防衰老，抗衰老功能的研究是当前食品研究的重要领域，根据抗衰老自由基生物的理论，抗氧化能力成为抗衰老活性添加物筛选的主要依据[1-2]，如何从天然植物资源中提取出具有抑制自由基氧化能力的活性物质是当前化学研究领域的热点之一[3-4]. 苹果中富含黄酮类、多酚类、色素类等多种有重要作用的化学活性成分，且是我国四大水果之首，世界产量第一，营养丰富，人们喜爱的水果之一.其中苹果中黄酮类化合物是优良天然抗氧化剂，具有良好的生物和药理活性[5-6]，有抗氧化、抗菌、增强骨质、防辐射、抗动脉硬化，还可以预防肿瘤、心血管疾病等作用，且对人的身体没有毒害作用[7-12].因此，开发和利用苹果黄酮类化合物有着很好的实用价值. 苹果皮渣或未成熟苹果是废弃物，如果不进行综合开发利用，最大可能提取出这些所含丰富的黄酮类、多酚类、色素类等活性化合物，不仅浪费了宝贵的资源，还有污染环境的潜在危害. 近来年，关于苹果中多酚的提取及抗氧化活性的研究较多，但是对苹果皮中的黄酮类化合物及其抗氧化性的测定研究较少. 1材料与方法 1.1原料和试剂 新鲜苹果,市售，产地为山东威海；Galvinoxyl自由基东京仁成工业株式会社，Trolox Sigma-Aldrich(st.Louis,MO)，无水乙醇(分析纯)江苏强盛功能化学股份有限公司. 1.2主要仪器设备 UV-7504型紫外可见分光光度计，上海精科实业有限公司；MCR-3型微波炉上海捷呈仪器有限公司；NB-XZ20型旋转蒸发仪，郑州南北仪器设备有限公司，电子天平，上海良平仪器仪表有限公司；WBE-SDJ型电热恒温鼓风干燥箱，东莞市威邦仪器股份有限公司. 1.3实验方法 1.3.1苹果皮中的黄酮类提取流程 用果刀削新鲜苹果皮，再用果刀将大块的苹果皮渣切成若干块，紧接着称取一定质量的苹果皮渣，然后用乙醇溶液做溶剂，在微波炉中回流提取3次，最后用旋转蒸发仪得到苹果皮渣黄酮类浓缩液. 1.3.2单因素对黄酮类提取率的影响 在不同的实验条件下，进行3次重复实验取平均值，分别考察回流时间、料液比、微波炉功率及溶剂浓度4个因素对黄酮类提取率的影响，并用紫外可见分光光度计测定其提取液的吸光度.4因素实验设计如下：每组称取2.07 g的苹果皮渣，固定溶剂浓度60%的乙醇，微波功率390 W，料液比1∶5，分别回流1 min、2 min、3 min、4 min、5 min.每组称取2.07 g的苹果皮渣，设定回流时间2 min，微波功率390 W，溶剂浓度60%的乙醇，料液比(g/mL，下同)分别为1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8.每组称取2.04 g的苹果皮渣，固定料液比1∶5，回流时间2 min，溶剂浓度60%的乙醇，分别用微波功率为130 W、260 W、390 W、520 W、585 W进行微波加热.每组称取2.06 g 苹果皮渣，设定回流时间2 min，微波功率390 W，料液比1∶5，分别选择40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇及水作为溶剂. 1.3.3苹果皮渣黄酮类提取液的处理 在最佳工艺的条件下，收集所得到提取液，然后通过旋转蒸发仪进行浓缩，收集滤液定容至50 mL，放在冰箱中储存待用. 1.3.4苹果皮渣黄酮类化合物的定量测定方法 苹果皮渣黄酮类跟葛根中黄酮类的结构相似，苹果皮渣黄酮类的含量的测定参照文献[11]方法进行，紫外可见分光光度波长选择249 nm. 1.3.5苹果皮渣黄酮类化合物清除GO·能力的测定 参照文献[12]方法，实验以Trolox为标准参照物，紫外可见分光光度波长选择428 nm，绘制Trolox浓度对GO·的清除率工作曲线并建立回归方程.根据工作曲线及回归方程，计算和评价苹果皮渣黄酮类对GO·相对清除能力. 图1　葛根素标准曲线 图2　回流时间对苹果黄酮类