SBT 10501-2008畜禽肉中地西泮的测定—高效液相色谱法.pdf

ICS 67. 050X 04SB备案号：25147—2008中华人民共和国商业行业标准SB/T 10501—2008畜禽肉中地西泮的测定高效液相色谱法Determination of diazepam in muscle of livestock and poultry--High performance liquid chromatography2008-09-27 发布2009-03-01实施中华人民共和国商务部发布 中华人民共和国国内贸易行业标准畜禽肉中地西泮的测定高效液相色谱法SB/T 10501—2008*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销*开本880×12301/16印张 0.5 字数 8 千字2009年2月第一版2009 年2月第一次印刷*书号：155066·2-19502如有印装差错告由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：（010SB/T 10501—2008前言本标准的附录 A 为资料性附录,本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。本标准主要起草人：侯晓林、宋德华、金社胜、刘文娟。本标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。I SB/T 10501—2008畜禽肉中地西泮的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了畜禽肉中地西泮的高效液相色谱(HPLC)测定方法。本标准适用于鸡肉和猪肉中地西泮残留的检测。本方法的最低检测限为 0.01 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682--2008,ISO3639:1987,MOD)3　方法原理被检样品组织中地西泮经乙腈提取，固相萃取净化，用反相高效液相色谱-紫外检测器进行检测，采用外标法定量。4 试剂与材料除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。4.1 乙腈:色谱纯。4.2甲醇:色谱纯。4.3 乙酸铵。4.4 异丙醇。4.5 乙酸。4.6 高氯酸。4.7 三乙胺。4.8地西洋标准品。4.9C1s固相萃取小柱:500 mg,3 mL,或相当者。4.101%高氯酸溶液:取 1 mL高氯酸,用水稀释至 100 mL。4.11微孔针筒式滤膜0.2μm。4.12标准溶液4.12.1标准贮备液分别精密称取50.0mg（根据纯度折算成纯物质）地西泮标准品，用乙溶解并于50mL容量瓶定容，一18℃避光可稳定保存6个月。4.12.2标准工作液临用前，取上述标准贮备液，用1%高氯酸水溶液稀释成浓度为 0.05 μg/mL,0.10 μg/mL，0.20 μg/mL,0.50 μg/mL 和1.00 μg/mL的标准工作液，进样测定。4.13淋洗液：甲醇：水：三乙胺(35：65：0.1,体积比）。1 SB/T 10501—20085 仪器与设备5.1配有紫外-可见光检测器的高效液相色谱仪。5.2 天平:感量 0.01 g。5.3 天平:感量 0.000 1 g。5.4 冷冻离心机。5.5组织匀浆机。5.6 旋转蒸发仪。6样品制备肌肉组织样品经高速组织匀浆机匀浆。保存于20℃冰箱待用。7 分析步骤7.1样品处理7. 1.1 提取称取5 g(准确至0.01 g)匀浆试样,加无水硫酸钠5 g，用 20 mL.乙腈提取，超声 15 min,4000 r/min离心5min，取上清液，再用20mL乙睛重复提取一次，超声，离心，收集两次上清液于鸡心瓶中，加10mL异丙醇,50℃减压旋转蒸至近干,用5mL甲醇-水(2：8,体积比)溶解。7.1.2 净化C1s固相萃取柱依次用5 mL甲醇，5 mL水,5 mL甲醇-水(2：8,体积比)平衡,将上述复溶液上样：再用5mL淋洗液(4.13)洗涤鸡心瓶，用鸡心瓶洗涤液洗涤小柱;最后用5mL甲醇-乙酸(95：5,体积比)洗脱样品残留，收集洗脱液。将收集的洗脱液于50℃水浴氮气吹干，用1%高氯酸水溶液1mL，正已烷2mL复溶,静置分层后取下层水相过 0.2 μm滤膜，供HPLC(高效液相色谱)分析。7.2测定7.2.1 液相色谱参考条件色谱柱:Grace Smart RP18(250X4.6 mm,5μm)或相当者。流动相：0.02mol乙酸铵水溶液：乙腈（40：60，体积比）。流速:1.0