SN_T 3585-2013出口活鱼克林霉素检测技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3585—2013出口活鱼克林霉素检测技术规范Inspection protocol for clindamycin for export live fish2013-08-30 发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局1AES SN/T 3585--2013言前本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：卢晓中、汤志旭、王凤美、许辉、李强、郝建光、罗忻。一 SN/T 3585---2013出口活鱼克林霉素检测技术规范1范围本标准规定了出口活鱼中克林霉素残留液相色谱、液相色谱串联质谱检测技术规范。本标准适用于出口活鱼中克林霉素残留的检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。3.1甲醇:色谱纯。3.2乙腈：色谱纯。3.3正乙烷：色谱纯。3.4 磷酸二氢钾。3.5磷酸。3.60.1 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH=2.5）:13.61 g磷酸二氢钾溶解于 1L水中,用磷酸溶液调节pH一2.5,使用前配制。3.7甲醇-水溶液（2+8,体积比）：200mL甲醇与800mL水混合后振荡摇匀。3.8乙腈-水溶液（1十1，体积比）：50mL乙腈与50mL水混合后振荡摇匀。3.9克林霉素标准物质：克林霉素（分子式：C18H33CIN2OsS;CAS号：18323-44-9），纯度≥98%。3.10克林霉素标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取10.0mg克林霉素标准物质放人10mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度，18℃避光保存。3.11克林霉素标准中间溶液：10.0μg/mL。移取0.1 mL标准储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，4℃避光保存。3.12克林霉素标准工作溶液：移取适量标准中间溶液，用样品空白提取液定容至1.0 mL，配制25ng/mL～500ng/mL系列基质标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱法测定用：配制0.25μg/mL～5 μg/mL系列标准工作溶液，供液相色谱法测定用。用前配制。3.13Oasis HLB固相萃取柱或相当者:500 mg,6 mL（或相当者），使用前,分别用 3 mL 甲醇、3 mL水活化。3.14 滤膜:0.22 μm。4仪器4.1高效液相色谱仪。1 SN/T 3585-20134.2高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.3 天平:感量 0.01 g,0.000 1 g。4.4　捣肉机。4.5氮气浓缩仪。4.6具塞聚丙烯离心管:50 mL。4.7 离心机。4.8振荡器。5抽样与样品制备5.1检测批和抽样数量按出口活鱼同一养殖池塘、扇一规格活鱼为一检测批。每检验批随即抽取样品时，至少取活鱼两条以上，且保证总重量大于1.0kg，标明标记并及时送实验室。5.2样品制备送实验室待测活鱼，将其室息后，开膛，去除内脏，取可食部分用捣肉机捣碎成浆状，然后按四分法分样，均分成2份，装人洁净容器中密封，并标明标记5.3试样的保存将试样于一18℃冷冻保存。在抽样及样品制备的操作过程，应防止样品受到污染。6测定步骤6.1　提取称取5g均匀试样（精确到0.01g）于50mL离心管中，咖入15mL乙腈，涡旋混匀1min，振荡10min，在4℃下以8000r/min转速离心5min，取上清液于另一离心管中，残渣用10ml.乙腈洗涤，涡旋30 s后以8000 r/min离么5mih,合并上清液。加人,5mL乙腈饱和正已烷，振荡10min，离心分离后弃去正已烷，合并乙腈层，40℃下氮气吹干，用5mL20%甲醇水溶液溶解。6.2　净化上述溶解液过OasisHLB柱，依次用3mL水，3mL'20%甲醇水溶液淋洗，再用5mL甲醇洗脱，洗脱液于40℃氮气吹干。用1ml乙睛水（1+1，体积比）溶解残渣，过0.22um滤膜，供高效液相色谱或高效液相色谱-串联质谱测定。6.3测定6.3.1液相色谱法液相色谱条件液相色谱条件如下：a）色谱柱:Cig柱,150 mmX2.1 mm（内径）,5 μm 或相当者;b)进样量：10 μL;c)流速:0.4 mL/min;2 SN/T 3585—2013d)柱温:30℃;e）流动相：乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=2.5)(20十80体积比）；f）检测波长：210 nm。色谱测定按照液相色谱条件对样液及标准工作溶液