SN 1350-2004牛锥虫病补体结合试验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1350—2004牛锥虫病补体结合试验方法Protocol of compliment fixation test for trypanosomiasis2004-06-01发布2004-12-01实施B中华人民共和国营查发布，数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1350—2004前 言本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：孟广校、徐彪、朱咏梅、生成选。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I. SN/T 1350-2004牛锥虫病补体结合试验方法1范围本标准规定了牛锥虫病补体结合试验方法。本标准适用于牛锥虫病的抗体检测。2 试验材料2.1器材96孔“U"型微量板、10 μL～100 μL可调移液器、培养箱、水浴锅、15mL尖底离心管、离心机、12 mmX75 mm试管。2.2 试剂2.2.1溶血素：从生物制药厂购买,效价不低于1：1500。2.2.2补体：选择成年雄性豚鼠3只～4只，绝食 6 h～8 h后，从心脏采血，分离新鲜血清保存于普通！冰箱中备用。也可以购买冻干补体。2.2.3锥虫病抗原、阳性血清和阴性血清:从生物制品厂购买。2.2.4绵羊红细胞悬液的制备：见第A.1章。2.2.5巴比妥缓冲液(简称VBS)：见第 A.2章。2.2.6溶血标准比色孔的制备：见第A.3章。2.3血清的处理被检血清、标准阳性血清和标准阴性血清,使用前均需 56℃灭活 30 min。3预备试验3. 1溶血素效价的测定3.1.1配制1:20的补体。3.1.2溶血素稀释:将溶血素用VBS做1：500,1：1000,1：1 500,1：2000,1：2500,1：3000,1:3 500,1: 4 000,1: 4 500,1: 5 000 稀释。3.1.3溶血素效价测定：取96孔“U”型微量板，按表1中各成分的量加人各孔中。表 1 溶血素效价测定表单位为微升号管成分756823910溶血素补体红细胞# 14溶血素500 X1000 ×1500×2000 X2500 X3000 X3500 X4000×4500 X5000 X1 : 100稀释度溶血素2525252525252525252525VBS5050505050505050505075751100补体252525252525252525250251 t 203%红25252525252525252525252525细胞液 SN/T 1350--2004封板后于37℃～38℃放置30min,500g离心5min,检查结果。3.1.4溶血素效价的判定:在溶血素对照全部溶血、补体对照和红细胞对照不溶血的情况下,参照标准比色孔（见第A.3章)，完全溶血的溶血素的最高稀释倍数即为溶血素稀释度，般溶血素稀释度为1：2 000,在试验中使用 2 个溶血单位的溶血素。3.2补体效价的滴定3.2.1补体用VBS作系列稀释，分别为1：10,1:20,1:30,1：40,1：60,1：80,1：100,1：150,1 : 200,1 : 300,.......3.2.2取96孔“U”型微量板，按表2滴定补体效价。表2补体效价测定表(结果举例)单位为微升102345679孔号11: 101: 301: 601 + 801: 1001: 1501: 2001 + 300补体稀释度1 : 201: 40252525252525补体252525252525252525血清25阳 第一列25252525252525抗原252525性血252525252525清「第二列清2525 25VBS25252525252525252525 25252525252525血清阴第一2525抗原性2525 25 252525血清第二列清2525252525252525VBS2525震荡混匀后，于37℃保温 15min。25 2525252525252525252 单位溶血素2525252525 25252525253%红细胞震荡摇匀封板后，于37℃保温30min，以500g离心5min，参照标准比色孔（见第A.3章）观察结果。不溶不溶不溶不溶不溶不溶不溶不溶不溶不浴阳性血清加抗原全溶部浴不溶不溶全溶部溶不溶阳性血清未加抗原全溶全溶全溶部溶不溶不溶不溶全溶全溶全溶全浴全溶部溶阴性血清加抗原全溶全溶部浴不溶不溶阴性血清未加抗原全溶全溶全溶部溶不溶3.2.3补体效价的判定：补体效价是指阳性血清加抗原的孔完全不溶血，阳性血清未加抗原的孔以及阴性血清无论有无抗原的孔完全溶血所需补