组织培养基础.pdf

组培的基本操作 1、培养基的主要成分 ① 水分：构成培养基的绝大部分组分为水分。在研究上，常用蒸馏水来配制培养基，而最 为理想的水应该是纯水。 ② 无机盐类：无机盐类中根据植物的需要量可以分为大量元素和微量元素。植物从培养基 中吸收的大量元素有N、P、K等。它们是构成植物细胞中核酸、蛋白质以及生物膜系统 等必不可少的营养元素。微量元素包括Fe、Mn、Zn、B等，它们在培养基中的添加量虽 然很少，但也是不可缺少的，这些元素是很多酶和辅酶的重要成分，直接影响着蛋白质 的活性，铁又是叶绿素的重要成分。 ③ 有机营养成分 I、糖类物质：对于植物组织培养中幼小的外植体而言，由于其光合作用的能力较弱，培 养基中的糖类物质就成了其生命活动中必不可少的碳源和能源。除此之外，糖类的添加 还有调节培养基渗透压的作用 II、维生素类：维生素类物质的添加对愈伤组织和器官形成有促进效果。维生素C还有防 止组织褐变的作用 III、氨基酸类 ：在培养基中常用的氨基酸有甘氨酸、酪氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、天门 冬胺等。这些氨基酸类物质不仅为培养物提供有机氮源，同时也对外植体的生长以及 不定芽、不定胚的分化促进作用。 ④植物生长调节物质：植物生长调节剂在培养基中的用量虽然微小，但是其作用很大。它不 仅可以促进植物组织的脱分化和形成愈伤组织，还可以诱导不定芽、不定胚的形成，最常 用的有生长素和细胞分裂素，有时也会用到赤霉素和脱落酸。 ⑤天然物质； 椰子汁、香蕉泥等天然有机物质的添加，有时会有良好的效果，在这些天然 有机物质中，通常含有机营养成分或生理活性物质。 ⑥PH；pH过高时，培养基会变硬；pH过低时，则影响培养基的凝固 ⑦凝固剂：在配制固体培养基时，需要使用凝固剂。最常用的凝固剂是琼脂 ⑧其他添加物：有时为了减少外植体的褐变，需要向培养基中加入一些防止褐化的物质，如 活性碳、维生素C等。此外，在灭菌比较困难的植物材料时，也可以添加一些抗生素物质， 以此来抑制杂菌生长 。 2、培养基的基本类型 ①含盐量较高的培养基：其代表是MS培养基，主要特点是无机盐浓度高，特别是硝酸盐、 钾离子和铵离子含量丰富，元素平衡较好，缓冲性能好，微量元素和有机成分含量齐全 且丰富，是目前使用最广泛的培养基。 ②硝酸钾含量较高的培养基：有B5培养基、N6培养基等，其特点是培养基的盐类浓度较高， 铵态氮含量较低，但盐酸硫胺素和硝酸钾含量较高 ③中等无机盐含量的培养基：有Nitsch培养基等。这类培养基的共同特点是大量元素的含 量约为MS培养基的一半，微量元素种类少含量高，维生素种类多。 ④低无机盐含量的培养基：有White培养基等。此类培养基的共同特点是无机盐含量非常低， 为MS培养基的1/4左右，有机成分也很低。 3、MS、B5、N6、white培养基的特点 ①MS培养基的无机盐类浓度较高，尤其是铵盐和硝酸盐含量高，能够满足快速增长的组织 对营养元素的要求，是一种应用广泛的培养基。但它不适合生长缓慢、对无机盐类浓度要 求比较低的植物，尤其是不适合铵盐过高易发毒害的植物。 ②B培养基铵的含量比较低，在豆科植物上用得较多，也适用于木本植物 5 ③N培养基是在水稻、小麦以及其他植物的花粉和花药培养中被使用。其KNO和（NH）SO 6 3 4 2 4 含量较高，但不含元素钼。 ④White培养基是一种无机盐类浓度较低的培养基，pH为5.6，在一般植物组织培养中用途 也比较广泛，同时，它还非常适合于生根培养和幼胚的培养。 4 、培养基的配制的具体步骤： ① 取出母液并按顺序放好，并将有机营养物质贮存液溶化待用。将洁净的各种玻璃器皿如 量筒、烧杯、移液管、移液枪和玻璃棒等放在指定位置； ②取一只烧杯，放入1/3左右（配制培养基总量的1/3左右）纯水，将母液按顺序加入，并 不断搅拌； ③加入植物生长调节剂和蔗糖，待糖溶解后定容； ④将定容的培养基倒入容器中，加入琼脂，并加热使其完全溶解； ⑤调整pH,用预先配好的氢氧化钠或稀盐酸进行调整； ⑥将培养基分装倒培养器皿中，封好瓶口； ⑦灭菌，用高压锅灭菌 （121℃，15～20min）或过滤除菌； ⑧灭菌后待高压锅温度下降到50℃以下时，便可以取出、冷却凝固后待用。 5、外植体的选