蛋白质的共价结构.ppt

①肽键中C-N键有部分 双键性质 ——不能自由旋转 ②组成肽键原子处于 同一平面（肽平面） ③键长及键角一定 ④大多数情况以反式 结构存在 当前第30页\共有86页\编于星期六\10点 （一）肽单元 参与肽键的6个原子C?1、C、O、N、H、C?2位于同一平面，C?1和C?2在平面上所处的位置为反式(trans)构型，此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元 (peptide unit) 。 当前第31页\共有86页\编于星期六\10点 共价主链 当前第32页\共有86页\编于星期六\10点 （二）、肽的物理化学性质 肽末端α-羧基pKa值比游离AA中的大。 肽末端α-氨基pKa值比游离AA中的小。 等电点（两性）。 酸碱性质取决于： —α-羧基、α-氨基、侧链基团的解离 具有双缩脲反应——Pr特有的反应。 当前第33页\共有86页\编于星期六\10点 （三）、 天然存在的重要多肽 当前第34页\共有86页\编于星期六\10点 当前第35页\共有86页\编于星期六\10点 当前第36页\共有86页\编于星期六\10点 谷胱甘肽(glutathione, GSH) 当前第37页\共有86页\编于星期六\10点 GSH过氧化物酶 H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶 NADPH+H+ NADP+ 当前第38页\共有86页\编于星期六\10点 三、蛋白质一级结构的测定 什么是Pr的一级结构？ 蛋白质中氨基酸的排列顺序。 当前第39页\共有86页\编于星期六\10点 当前第40页\共有86页\编于星期六\10点 1.样品必需纯（>97%以上） 2.知道蛋白质的分子量 3.知道蛋白质由几个亚基组成 4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量 计算每种AA的个数 5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量 前提 当前第41页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 (1) 测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。 蛋白质一级结构的测定 当前第42页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 (2) 多肽链的拆分 蛋白质一级结构的测定 当前第43页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体。 可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。 蛋白质一级结构的测定 当前第44页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 (3) 断开二硫键 在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。 蛋白质一级结构的测定 当前第45页\共有86页\编于星期六\10点 当前第46页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 蛋白质一级结构的测定 (4)测定每条多肽链的AA组成，并计算出AA成分的分子比 当前第47页\共有86页\编于星期六\10点 当前第48页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 (5)分析多肽链的N-末端和C-末端 (6)多肽链断裂成多个肽段 采用两/多种不同的断裂方法将多肽 断裂成两套或多套肽段，并将其分离。 蛋白质一级结构的测定 当前第49页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 (7)测定每个肽段的氨基酸顺序 蛋白质一级结构的测定 (8)确定肽段在多肽链中的次序 利用两/多套肽段的AA顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的AA顺序。 当前第50页\共有86页\编于星期六\10点 （一）、蛋白质测序策略 (9)确定原多肽链中二硫键的位置。 蛋白质一级结构的测定 当前第51页\共有86页\编于星期六\10点 两类多肽链末端氨基酸残基： N-端氨基酸 C-端氨基酸 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。 （二）、末端氨基酸残基测定 当前第52页\共有86页\编于星期六\10点 Sanger法 1、 末端分析 ? 二硝基氟苯（DNFB）法 O 2 N F N O 2 + H 2 N C H C R O H N C H C R O O 2 N N O 2 H + H 2 O O 2 N N O 2 H N C H C R O O H + 氨基酸 DNFB N-端氨基酸 DNP衍生物 DNP-氨基酸 （二）、末端氨基酸残基的鉴