人胆系上皮组织类器官构建、质量控制与保藏操作指南.pdf

人胆系上皮组织类器官构建、质量控制与保藏操作指南 1 范围 本文件提供了人胆系上皮细胞构建、质量控制和保藏的基本原则、操作流程方法以及检测指标与检 测方法的指导与建议。 本文件适用于人胆系上皮活组织类器官的培养、传代、储存、复苏和质量控制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 37864—2019生物样本库质量和能力通用要求 （ISO20387:2018） GB/T 38736—2020 人类生物样本保藏伦理要求 GB/T42060—2022医学实验室样品采集、运送、接收和处理指南 （ISO/TS20658:2017） WS233—2017 病原微生物实验室生物安全通用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 类器官 organoids 类器官是干细胞、前体细胞和/或分化细胞通过细胞-细胞间以及细胞-基质间的互作而自发组织形成 的体外三维结构，能在多个方面再现体内相应组织或器官的结构与功能。 3.2 胆系上皮 biliary epithelium 胆道系统主要包括肝总管、胆总管和胆囊。胆系上皮为肝外胆道系统上皮组织和胆囊粘膜上皮组织。 3.3 3D细胞培养 three-dimensional cellculture 将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养, 使细胞能够在载体的三 维立体空间结构中迁移、生长, 构成三维的细胞-载体复合物。 3.4 胆系上皮类器官培养基 culture medium of biliary epithelium organoids 1 T/CRHA019 2023 — 适合胆系上皮干细胞生长及分化所需微环境，能维持胆系上皮细胞长期体外扩增培养，保持胆管上 皮细胞/胆囊粘膜层上皮细胞特性，实现体外胆系上皮细胞类器官长期存活的培养介质。 3.5 3D培养基质胶 matrix 组成成分包括但不限于层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，添加物包括但不限于 生长因子、小分子化合物和/或微量元素激素。在室温条件下能够聚合形成具有生物学活性的三维基质， 模拟体内细胞基底膜结构和功能，能够为胆系上皮细胞的生长提供支架。 3.6 类器官传代 passage 将培养至一定大小、状态良好的类器官采用物理机械吹打或联合酶消化方法使其解离为小细胞团或 单细胞悬液，再重新接种于与原培养条件相同的培养体系内，继续进行类器官培养。新一代类器官与原 来类器官具有相同的形态功能特征。 3.7 类器官冻存 cryopreservation 将类器官解离成小细胞团或单细胞悬液后，加入冻存保护剂，通过程序降温最终置于-196 ℃液氮 中低温保存，使其暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要的时候能够通过复苏用于试验的 过程。 3.8 类器官复苏 thawing 将处于深低温冻存的类器官取出恢复其继续生长状态的过程。 3.9 诱导分化induced differentiation 细胞培养中通过添加诱导剂将细胞向目的细胞诱导分化的过程。 3.10 知情同意 informed consent 有自主判断能力的供体或其法定监护人，在获得并充分了解样本和数据捐赠相关信息之后，供体所 受到的风险最小，且没有受到任何利诱或恐吓等不当行为影响的前提下，自愿自主的捐赠个人生物样本 及其关联数据，并与采集者/收集者共同签署的文件。 注：知情同意书由采集者/收集者和被收集者共同签署，一式两份。正本由采集者/收集者保存，被 收集者保存副本。 [来源：GB/T38736—2020] 3.11 类器官存活率 organoids viability 2 类器官保持活性的属性 （例如，新陈代谢活跃，具有增殖能力，有完整的三维结构，或有能力恢复 这些功能）。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 （按字母顺序排列） CK19 —— 细胞角蛋白19 （Cytokeratin 19） DNA