人肝胆肿瘤细胞类器官构建、质量控制与保藏操作指南.pdf

人肝胆肿瘤类器官构建、质量控制与保藏操作指南 1 范围 本文件提供了肝胆肿瘤类器官构建、质量控制与保藏的的基本原则、操作流程方法以及检测指标与 检测方法的指导与建议。 本文件适用于肝胆肿瘤细胞类器官的培养、传代、冻存、复苏、质量控制与保藏过程。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 37864—2019生物样本库质量和能力通用要求 （ISO20387:2018） GB/T 38736—2020 人类生物样本保藏伦理要求 GB/T42060—2022医学实验室样品采集、运送、接收和处理指南 （ISO/TS20658:2017） WS233—2017 病原微生物实验室生物安全通用准则 WS213—2018 丙型肝炎诊断 WS/T299—2022 乙型病毒性肝炎诊断标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 类器官 organoids 类器官是干细胞、前体细胞和/或分化细胞通过细胞-细胞间以及细胞-基质间的互作而自发组织形成 的体外三维结构，能在多个方面再现体内相应组织或器官的结构与功能。 3.2 患者来源肝胆肿瘤类器官 patient derived hepatobiliary tumor organoid 由病理诊断为肝胆肿瘤患者自体肿瘤组织或细胞样本中提取的肿瘤细胞，通过3D培养形成的，可 以在体外扩增并重现原始肿瘤的病理形态和遗传特征的类器官。 3.3 肝胆肿瘤类器官培养基 culture medium for human hepatobiliary tumor organoids 1 可以实现体外模拟肝胆肿瘤细胞生长及扩增所需微环境，能诱导肝胆肿瘤细胞长期体外扩增培养， 维持原始肿瘤细胞特性，实现体外肝胆肿瘤活组织类器官的长期存活的培养介质。 3.4 3D培养基质胶 matrix 组成成分包括但不限于层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，添加物包括但不限于 生长因子、小分子化合物和/或微量元素、激素。在室温条件下能够聚合形成具有生物学活性的三维基 质，模拟体内细胞基底膜结构和功能，能够为肝脏肿瘤细胞的生长提供支架。 3.5 类器官传代 passage 将培养至一定大小、状态良好的类器官采用物理机械吹打或联合酶消化方法使其解离为小细胞团或 单细胞悬液，再重新接种于与原培养条件相同的培养体系内，继续进行类器官培养。新一代类器官与原 来类器官具有相同的形态功能特征。 3.6 类器官冻存 cryopreservation 将类器官解离成小细胞团或单细胞悬液后，加入冻存保护剂，通过程序降温最终置于-196 ℃液氮 中低温保存，使其暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要的时候能够通过复苏用于试验的 过程。 3.7 类器官复苏 thawing 将处于深低温冻存的类器官取出恢复其继续生长状态的过程。 3.8 伦理审查委员会 ethics review committee 负责对科学研究中涉及伦理道德进行评估和审查的专门组织。 3.9 知情同意 informed consent 有自主判断能力的供体或其法定监护人，在获得并充分了解样本和数据捐赠相关信息之后，供体所 受到的风险最小，且没有受到任何利诱或恐吓等不当行为影响的前提下，自愿自主的捐赠个人生物样本 及其关联数据，并与采集者/收集者共同签署的文件。 注：知情同意书由采集者/收集者和被收集者共同签署，一式两份。正本由采集者/收集者保存，被 2 收集者保存副本。 [来源：GB/T38736—2020] 3.10 肿瘤细胞存活率 tumor cellviability 能够增殖、保持代谢活性、能形成肿瘤类器官的细胞比例。 3.11 环境污染environmental contamination 从环境或其他细胞中引入多余的化学或生物物质。 [来源：WS233—2017] 3.12 无菌技术 aseptic technology 在实验室