北美海棠组织培养中褐变影响因子分析-《江苏农业科学》(2016年12期).docx

龙源版权所有 北美海棠组织培养中褐变影响因子分析作者：贾晓梅 周悦 崔彬彬 曹柳青来源：《江苏农业科学》2016年第12期 摘要：为解决北美海棠组培快繁和组织再生中的褐变问题，分析北美海棠组织培养中外植体褐变影响因子。结果表明，茎段、嫩叶、嫩芽3种外植体中，褐变程度最低的为茎段；MS+1.0 mg/L 2，4-D的培养基上外植体褐变程度最低；暗培养下褐化程度低于光照培养；遮光暗处理外植体母株枝条可减轻褐变；低温条件下培养可抑制褐变；4月进行培养时外植体褐化程度最低，随后随月份增加褐变程度加重；培养基中附加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）可减轻外植体褐变，而附加柠檬酸（CA）、维生素C以及维生素C预处理外植体均不能明显降低褐变率。 关键词：北美海棠；褐变；组织培养；PVP；维生素C 中图分类号： S685.990.4+3文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）12-0091-03 收稿日期：2016-02-01 基金项目：河北省科学技术研究与发展计划（编号；河北省高等学校科学技术研究（编号：Z2013008）；保定学院科研基金（编号：2012Z08）；保定学院本科教学工程建设项目（编号；保定学院科研团队（编号：KYTD2013001）；保定学院本科教学工程建设项目重点发展学科（编号：X。 作者简介：贾晓梅（1978—），女，河北曲阳人，硕士，副教授，主要从事植物生理和生物技术的研究。E-mail：jxmqiang@。 北美海棠（Malus micromalus cv. “American”）为蔷薇科苹果属落叶乔木[1-2]，花、叶、枝条和果实颜色多样，在不同季节中形态多样，观赏价值极高，具有耐寒、抗病等特性，还具有较强的观赏性和长时间的观赏周期，是优秀的园林植物种类[3]，在我国的园林绿化中有非常大的应用潜力。北美海棠主要通过扦插嫁接进行繁殖，虽然操作简单，但是繁殖速度较慢，难以在短期内满足市场需求，对北美海棠进行组织培养则可以加快繁殖速度[4]。在果树尤其是木本果树的组织培养中，易出现外植体或培养物的褐化、枯死现象，即褐变现象，又称酚污染[5-6]，褐变在北美海棠组织培养过程中也普遍存在。北美海棠接种24 h便开始出现褐变，导致外植体活性明显降低甚至死亡，难以建立组培快繁体系，限制了其组织培养及遗传转化工作的开展。有关褐变的研究在板栗[7]、芭蕾苹果[8]、龙眼[9]、核桃[10]、中国李[11]和油桃[12]等植物上已获得一定结果，但关于北美海棠组培过程还鲜有报道。本试验使用常规组培方法，比较不同取材时间、不同外植体、不同激素种类与配比、不同培养条件及预处理方法下培养过程中褐化程度的差异，以期找到适合控制褐变的措施，为北美海棠组培快繁和组织再生奠定基础。 1材料与方法 1.1试验材料 试验用外植体为北美海棠的嫩芽、嫩叶和茎段，于2015年4月至8月采自生长健壮、无病虫害的北美海棠。 1.2试验方法 1.2.1外植体的接种培养剪取的外植体用20%皂粉水浸泡 25 min，自来水冲洗1.0～1.5 h。随后将材料在超净工作台上，用75%乙醇消毒20～30 s，再用0.1 % HgCl2消毒7～8 min，无菌水冲洗5遍，置于无菌干燥滤纸上吸干水分。将枝条切分成05～1.0 cm 的带芽茎段、不带芽茎段，将叶片切为0.5 cm2，接种至培养基中。以MS培养基为基本培养基，添加蔗糖30 g/L，琼脂8 g/L，调节pH值为5.8。培养条件为温度（23±2）℃，光照度1 500～2 000 lx，时间12 h/d。 1.2.2不同外植体及培养基对褐变的影响以MS为基本培养基，添加不同浓度6-BA、NAA、2，4-D的3种增殖培养基：（1）MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA；（2）MS+1.0 mg/L 2，4-D；（3）MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2，4-D。将北美海棠的茎段、嫩芽、嫩叶3种外植体接种在上···试读结束