影响牡丹石榴外植体褐变的因素分析-《江苏农业科学》(2016年9期).docx

龙源版权所有 影响牡丹石榴外植体褐变的因素分析作者：王兰明 刘艳芬 高彦魁来源：《江苏农业科学》2016年第09期 摘要：褐变是影响牡丹石榴离体培养成功的关键因素之一。为减轻牡丹石榴初代培养中的褐变问题，研究基本培养基类型、附加物、光照条件、继代周期、取材时间5种因素对外植体褐变的影响。结果表明：适宜的基本培养基为1/2MS；黑暗处理对褐变的影响不明显；聚乙烯吡咯烷酮对褐变有明显的抑制作用，最佳处理浓度为2.0 mg/L；4月下旬取带芽的半木质化茎段为外植体，其褐变程度最轻；取材时间和转接次数对褐变的影响明显。 关键词：牡丹石榴；聚乙烯吡咯烷酮；外植体；褐变；因素 中图分类号：S665.404+.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）09-0181-03 石榴（Punica granatum）为石榴科石榴属植物，是我国重要的果树和观赏花木之一。牡丹石榴是近年来选育的新优品种，其花朵硕大似牡丹，花期長达5个月，果大味美，且花果同期同树，是花果俱佳的珍贵石榴品种[1-2]，颇具推广价值。 石榴常规的扦插、分株等繁殖方法，繁殖速度慢，难以满足日益增多的种苗需求。目前，已有学者致力于通过组织培养进行石榴快速繁殖的研究[3-5]。但是由于石榴体内酚类物质含量高，组织培养过程中外植体褐变严重[6-7]，常造成外植体死亡，成为石榴离体培养过程中的关键制约因素。目前，关于牡丹石榴离体再生技术虽然鲜有报道[8]，但没有关于其褐变这一关键问题进行报道和系统研究。本试验以牡丹石榴带芽茎段为外植体，研究基本培养基、附加物、光照条件、转接次数、取材时间5种因素对外植体褐变的影响，以探讨减轻牡丹石榴离体培养中褐变现象的因素条件，为其离体再生体系的建立和规模化繁殖提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 试验材料取自河北工程大学实验基地引进的3年生牡丹石榴树苗。 1.2 试验方法 试验于2014年4月下旬进行，以牡丹石榴半木质化茎段为外植体，经过常规消毒后，剪切成单芽茎段，接种于各处理培养基，进行单因子试验。培养基和培养条件若无特殊说明，蔗糖含量均为30 g/L，琼脂含量均为5.5 g/L，pH值5.8，培养温度25 ℃，光照时间16 h/d，光照度2 500 lx。接种1周后统计各处理的褐变率和褐变系数，5周后统计褐变死亡率、萌芽率、腋芽生长状况。 相应计算公式：外植体污染率=污染的外植体总数/接种的外植体总数×100%；褐变率=存活的褐变总数/存活的外植体总数×100%；存活率=存活的外植体总数/接种的外植体总数×100%；褐变指数=（∑褐变级数×该级个数×100）/（褐变总数×最高级级数）。褐变级数：0级，茎段基部褐色物质渗出不明显，5周后腋芽正常萌动；1级，茎段基部有少量淡褐色物质渗出，5周后腋芽正常萌动；2级，茎段基部褐色物质扩散至茎段直径的1～2倍，5周后茎芽萌动缓慢；3级，深褐色物直径扩散至茎段直径的2倍以上，茎段部分变黑褐色，腋芽不萌动；4级，茎段基部有大量褐色物质渗出，5周后腋芽、茎段变黑死亡。 1.2.1 基本培养基的确定 2014年4月中旬，将表面灭菌的外植体接种于MS、1/2MS、1/3MS、1/4MS 4种含有不同浓度无机盐的基本培养基中，每种培养基均添加0.5 mg/L6-BA、0.1 mg/L IBA。每个处理接种8～10瓶，每瓶接种2个外植体。重复3次，数据用SPSS统计软件分析。 1.2.2 光照条件的确定 2014年4月中旬，将外植体表面灭菌后接种于MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA培养基中，光照条件共设3个处理，分别为黑暗、光照时间16 h/d、全光照。每个处理接种12～13瓶，每瓶接种2个外植体。 1.2.3 附加物浓度的确定 2014年4月下旬，附加物聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，简···试读结束