多菌灵降解菌djl-6和啶虫脒降解菌D-2液体菌剂的研发-《江苏农业科学》(2020年17期).docx

龙源版权所有 多菌灵降解菌djl-6和啶虫脒降解菌D-2液体菌剂的研发作者：徐铭阳 卢家森 耿翔 刘卜郡 何健 黄星来源：《江苏农业科学》2020年第17期 摘要：以长期受多菌灵和啶虫脒农药污染的土壤中分离筛选得到的多菌灵降解菌株庆笙红球菌（Rhodococcus qingshengii sp. nov. ）djl-6和啶虫脒降解菌株噬染料菌（Pigmentiphaga sp. ）D-2为供试菌株，研究了降解菌菌剂的不同保存剂型与初步应用的情况。结果表明，2株降解菌均以苯甲酸钠作为防腐剂的处理效果最好，能维持活菌数较高且不产生杂菌污染。降解菌djl-6复配保护剂的最佳使用浓度：0.30%柠檬酸钠、0.30%羧甲基纤维素、0.20% CaCl2。降解菌D-2复配保护剂的最佳使用浓度：0.20%糊精、0.20%柠檬酸钠、0.30% CaCl2。与对照相比，添加保护剂后，菌株djl-6、菌株D-2活菌数分别够提高32.03%、38.70%。2株菌的液体菌剂保存45 d后，降解菌djl-6能够在10 d内将土壤5 mg/kg多菌灵降解95.23%，降解菌D-2能够在10 d内将土壤5 mg/kg啶虫脒降解92.75%，有效延长了液体菌剂的保存期。 关键词：多菌灵降解菌;啶虫脒降解菌;液体菌剂;保存条件 中图分类号： X172 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2020）17-0270-06 设施农业作为农业现代化发展的重要产业越来越受到各国政府的重视，设施农业不仅有效解决了我国淡季期间蔬菜短缺问题，还促进了居民传统消费结构的改变[1]。但是设施农业中蔬菜病虫害较多，农药的使用率也相对较高，以多菌灵和啶虫脒为代表的农药因其高效低毒的特点[2-4]而被广泛应用于设施农业之中。多菌灵是一种内吸性的廣谱杀菌剂，土壤中残留的多菌灵会导致土壤微生物数量下降，抑制土壤脱氢酶、磷酸酶活性[5-6]。啶虫脒是一种内吸杀虫剂，残留在土壤中会抑制土壤固氮菌、放线菌活性，对土壤动物产生慢性毒性[7-8]。 应用微生物修复农药残留污染是一种公认的安全有效的方法。目前，我国农药残留相关研究主要集中在高效降解菌株的筛选和培育上，在微生物菌剂的开发应用方面的研究仍然不够完善[9-11]。微生物作为一种活体生物，其保存情况极易受到外界环境的影响，微生物液体菌剂的储存一直是阻碍降解菌菌剂的大规模应用的难题，而目前关于微生物液体菌剂保存条件的研究非常少[12-14]。笔者所在实验室分离并保藏了多菌灵、啶虫脒降解菌株，其中多菌灵降解菌株能在7 d内将5 mg/kg多菌灵降解80.0%，啶虫脒降解菌株在5 d内将 10 mg/kg 啶虫脒降解90.0%。由于液体菌剂中的微生物易受周围环境影响从而导致菌剂保存期短，本研究首先筛选出了2个菌株的液体菌剂防腐剂及其使用浓度，研究了菌剂不同保藏条件对其活菌数以及降解率的影响，以期为农药降解菌菌剂的保存与应用提供一定的理论基础。 1 材料与方法 1.1 试剂与培养基 多菌灵原药购自江苏省新沂农药有限公司（纯度99.8%）。啶虫脒原药购自绿源制药集团（纯度98.3%）。无机盐培养基：硝酸铵1.0 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾1.5 g/L，氯化钠1.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，pH值7.0。 LB培养基：酵母浸出物5.0 g/L，蛋白胨 10.0 g/L，氯化钠10.0 g/L，超纯水1 L，pH值7.0，固体培养基加入1.5%～2.0%的琼脂。 D-2发酵培养基：葡萄糖9 g/L，硫酸铵 0.9 g/L，酵母膏0.3 g/L，氯化钠0.1 g/L，碳酸钙 1 g/L，磷酸氢二钾1 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，pH值7.0～7.2。 djl-6发酵培养基：葡萄糖8 g/L，硫酸铵 0.8 g/L，酵母膏0.2 g/L，氯化钠0.1 g/L，碳酸钙0.5 g/L，磷酸氢二钾1.5 g/L，MgSO4·7H2O 0.1 g/L，pH值7.0～7.2。 1.2 供试菌株、供试作物与土壤 多菌灵降解菌株庆笙红球菌（Rhodococcus qingshengii sp. nov. ）djl-6，啶虫脒降解菌株噬染料菌（Pigmentiphaga sp. ）D-2，均由笔者所在实验室分离并保藏。 供试青菜品种为上海青，购自南阳青青种业。 供试土壤为黄棕壤，采集于南京农业大学牌楼试验基地。 1.3 液体菌剂防腐剂的筛选 1.3.1 防腐剂的初筛 设置菌株djl-6、菌株D-2这2组处理，每组处理取12个已灭菌的500 mL三角瓶（共24个）。每种菌设置4个防腐剂添加处理，依次为丙酸钙、苯甲酸钠、山梨酸钾、不添加试剂（CK），每个处理3个平行，共1