单孢继代培养对茄链格孢生长和产孢的影响-《江苏农业科学》(2019年9期).docx

龙源版权所有 单孢继代培养对茄链格孢生长和产孢的影响作者：刘华娇　谷青　赵冬梅　张岱　潘阳　杨志辉　朱杰华来源：《江苏农业科学》2019年第09期 摘要：继代培养对茄链格孢（Alternaria solani）的形态、菌落颜色、生长和产孢等生物学性状均会产生影响。经过连续单孢分离和培养，获得茄链格孢的2次继代培养菌株。随着继代培养代数的增加，角变现象呈上升趋势，F1、F2代菌株出现角变现象的概率分别为23.33%、52.50%。通过十字交叉法和系列稀释法分别测定继代培养菌株的生长情况和产孢量。結果表明，无性F1、F2代与亲代相比，其生长量和产孢量均呈下降趋势，且F2代下降百分率更高。与亲代菌株相比，F1代的生长量下降1.25%～7.61%，F2代生长量下降10.07%～22.29%;F1代菌株单位面积产孢量降低 12.80%～84.60%，F2代菌株单位面积产孢量下降80.11%～96.50%，且产孢量与菌落颜色深浅密切相关，菌落颜色较深的菌株分生孢子单位面积的产孢量要高于菌落颜色浅的菌株。表明茄链格孢无性后代活力不断降低。 关键词：马铃薯早疫病;继代培养;生长量;产孢量;角变 中图分类号： S435.32文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）09-0160-03 由茄链格孢（Alternaria solani）引起的马铃薯早疫病是影响我国马铃薯生产的重要真菌病害之一。严重时，该病对马铃薯主产区造成的损失可达70%～80%[1]。马铃薯早疫病是一种气传多循环流行性病害，病菌对环境的适应能力强。自茄链格孢被报道以来，前人的研究多集中在其生物性状、侵染方式、药效防治等方面，关于实验室条件下单孢继代培养对茄链格孢生长情况及适应能力的影响国内外未见报道。 研究表明，继代培养可引起虫草、白僵菌等微生物的变异和生物学特性的改变。刘荻等发现，北虫草的组织分离株在继代培养中会发生明显的角变[2]。刘海英等发现，继代培养会造成玉米大斑病菌的菌丝生长速度变慢，产孢量降低[3]。张慧等研究发现，白僵菌产孢量随继代培养代数呈指数下降趋势[4]。许志斌对绿僵菌进行研究发现，随着继代培养代数的增多，菌株的产孢量逐渐降低[5]。孙召朋通过继代培养降低了白僵菌对玉米螟的毒力[6]。唐晓庆等研究发现，继代培养能逐渐增强球孢白僵菌的抗旱能力[7]。 Meng等分析发现，茄链格孢病菌的遗传变异很高，推测其可能存在隐藏的有性生殖[8]。除有性生殖外，还有一种可能是茄链格孢存在准性生殖现象，使病菌的遗传变异增高。单孢分离技术在病原真菌遗传特性、致病力分化等研究中有重要作用。单孢分离可以获得纯菌种，有利于更好地研究菌株的遗传变异。本试验通过对茄链格孢的单孢分离及其后代的继代培养，比较亲代与后代之间生长和产孢的差异，分析继代培养对茄链格孢的影响，旨在为说明茄链格孢较高的遗传变异及是否存在准性生殖现象提供理论依据。 1 材料与方法 本试验于2016年8月至2017年1月完成于河北农业大学马铃薯病害研究中心。 1.1 供试菌株 在笔者所在实验室的菌库中选取6株茄链格孢菌株，分别是采集自河北省的HB-1、HB-6，黑龙江省的HLJ-1、HLJ-9，内蒙古自治区的NMG-1和陕西省的SX-1。 1.2 单孢分离和继代培养 对6株野生型茄链格孢进行产孢培养并进行单孢分离。产孢培养参照刘丽丽的培养方法[9]进行诱导产孢;采用稀释法进行单孢分离，向每皿经诱导产孢的茄链格孢中加入5 mL无菌水进行冲洗，制备成孢子悬浮液，在一次性皿中倒入较薄的一层马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基，取1 mL稀释过的孢子悬浮液涂于皿中，静待一段时间，待培养基表面无流动液体时，在显微镜下将周围无菌丝的单个分生孢子连带培养基一起切割转移到新的培养基上培养，获得下一代菌株。 1.3 茄链格孢继代培养菌株生长量的测定 每个菌株分离10株单孢，培养7 d后采用十···试读结束