1株热带海洋光合细菌的筛选、鉴定及水质净化能力-《江苏农业科学》(2020年4期).docx

龙源版权所有 1株热带海洋光合细菌的筛选、鉴定及水质净化能力作者：张秀霞 王冬梅 李军涛 胡永华 郑佩华 鲁耀鹏 冼健安来源：《江苏农业科学》2020年第04期 摘要：从西沙群岛永兴岛滩涂底泥中，通过富集分离纯化得到1株光合细菌（编号YX-1），对菌株进行形态观察和生理生化特性分析，经16S rDNA鉴定为红假单胞菌。将该菌株接种到模拟富营养化养殖污水中，结果显示该菌株具有较强的COD、氨氮和亚硝酸盐去除能力，优于阳性对照菌株，可开发应用于海南水产养殖污水的净化处理。 关键词：光合细菌;分离;养殖污水;净化 中图分类号：S182文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2020）04-0278-04 收稿日期：2018-12-05 基金项目：农业农村部财政专项（编号：NFZX2018）;天津市水产生态及养殖重点实验室开放基金（编号：TJAE201808）。 作者简介：张秀霞（1982—），女，广东梅州人，硕士，工程师，主要从事水产健康养殖研究。E-mail：107265834@。 通信作者：冼健安，博士，副研究员，主要从事水产养殖生态及毒理学、水产动物营养与饲料学研究。E-mail：xian-ja@163.com。 光合细菌（photosynthetic bacteria，PSB）是一类具有光合色素、能在无氧条件下进行光合磷酸化的微生物，分布广泛，遍及江河、沼泽、湖泊、海洋、池塘及活性污泥和土壤中[1]，易培养，生长速度快，繁殖力和生命力强，与自然界的C、N、S化学循环有重要关系，在自然界自我净化过程中担负着重要角色，在污水净化、水产养殖、保健品研发、产氢、农业等多方面得到广泛应用[2-3]。PSB最初被应用于处理有机污水，后来逐渐引入应用到水产养殖当中。PSB在水产养殖上的研究和应用主要集中在调控、改善和稳定养殖水体的水质[4]，防治疾病的发生及利用PSB作为生物饵料和营养性添加剂[5-6]。 本研究从西沙群岛永兴岛滩涂底泥中富集并分离筛选出1株光合细菌菌株，对其形态学和生理生化特性进行了分析，并对其在模拟的富营养化对虾养殖污水中的净化效果进行了研究，为其进一步开发利用奠定基础。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1试验材料 试验使用饲料为本实验室自制对虾饲料，阳性对照菌为市售光合细菌产品。 1.1.2试验试剂 PCR扩增试剂购自TaKaRa公司，其他试剂购自广州化学试剂厂。 1.1.3培养基配方 富集培养基 NaCl 2.00 g、MgSO4·7H2O 0.20 g、NH4Cl 1.00 g、NaHCO3 2.00 g、KH2PO41.75 g、CH3COONa 3.00 g、酵母膏1.00 g，蒸馏水1 000 mL，pH值7.0[7]。 分离培养基 培养基成分见表1，按上储备液A、B、D、E配制好后用2 mol/L氢氧化钠溶液调pH值为7.0，置于高压蒸汽灭菌锅中121 ℃，灭菌20 min，若配固体培养基则再添加2%琼脂粉，储备液C、 F使用时在无菌超净工作台中用0.22μm针孔过滤器过滤后加入。 1.2方法 1.2.1分离纯化 样品底泥加无菌生理盐水重悬浮，1 000 r/min离心2 min，取出上清液6 000 r/min离心5 min，去上清，将沉淀采用无菌富集培养基重悬浮培养，液面加无菌液体石蜡覆盖，密闭瓶口，于30 ℃，光照强度为2 500～3 000 lx光照培养箱中培养。培养至液体变成红色或者底部有红褐色絮状物出现，将培养液装入无菌离心管，6 000 r/min离心5 min，沉淀采用富集培养基重悬浮后至培养箱中培养。重复上述培养步骤3次。将富集液梯度稀释后取培养液在固体分离培养基上涂布，采用双层平板法[8]多次纯化分离出纯种···试读结束